Пилотное исследование и технико-экономическое обоснование переноса генов гемопоэтических стволовых клеток при синдроме Вискотта-Олдрича

Синдром Вискотта-Олдрича (WAS) (OMIM 301000) представляет собой редкий сцепленный с Х-хромосомой иммунодефицит, вызванный мутациями в одном гене WAS, сопоставленном с Xp11.22-Xp11.3. и кодирующий белок синдрома Вискотта-Олдрича (WASP) 1. WASP является важным регулятором передачи сигналов актина с экспрессией, ограниченной гемопоэтическими клетками, и, таким образом, необходим для множества функций, включая активацию Т-клеток, миграцию дендритных клеток и образование подосом, а также B терминальное развитие и функционирование клетки. WAS характеризуется микротромбоцитопенией, рецидивирующими инфекциями, экземой и связан с высокой частотой аутоиммунных и лимфоидных злокачественных новообразований. Классический или тяжелый WAS обычно наблюдается у пациентов с нонсенс-мутациями или инсерциями/делециями, приводящими к сдвигу рамки считывания или мутациям сайта сплайсинга или миссенс-мутациям и приводящим к нестабильности белка 2. За некоторыми исключениями, WASP-отрицательные пациенты имеют классическое заболевание. У пострадавших пациентов резко сокращается ожидаемая продолжительность жизни.

В настоящее время единственным методом лечения пациентов с СВО является трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК). Это лечение наиболее успешно при наличии HLA-идентичного родственного донора или совместимого неродственного донора и приводит к коррекции микротромбоцитопении и иммунной дисфункции, даже при наличии стабильного смешанного химеризма. Однако даже пациенты, перенесшие совместимую ТГСК, могут страдать от значительной заболеваемости и смертности из-за реакции «трансплантат против хозяина» (РТПХ), и у многих пациентов отсутствует HLA-идентичный донор. Исход несовпадающей родственной ТГСК неизменно плохой с выживаемостью примерно 50%. Перенос генов является привлекательным альтернативным методом лечения WAS. Успешный перенос гена с использованием аутологичных ГСК с коррекцией генов позволил бы преодолеть клинические осложнения, связанные с РТПХ и ее лечением. Кроме того, в отличие от аллогенной ТГСК, перенос генов не будет ограничен наличием совместимых доноров. Несколько линий доказательств указывают на то, что частичное восстановление клеток с исправленными генами может быть достаточным для облегчения заболевания.

Мы предлагаем здесь экспериментальное и технико-экономическое обоснование переноса генов ex vivo с использованием лентивирусного вектора (LV) для трансдукции аутологичных CD34+ HSC, полученных из костного мозга. Клетки будут вводить пациентам, получающим циторедуктивную химиотерапию. Наши сотрудничающие исследователи в Европе разработали LV, кодирующую кДНК WAS человека под контролем промотора WAS и псевдотипированную с оболочкой гликопротеина вируса везикулярного стоматита (VSVg). Было показано, что этот w1.6_hWASP_WPRE (VSVg) LV (сокращенно w1.6W) эффективен как в доклинических моделях in vitro, так и in vivo. Безопасность, включая клеточную токсичность, инсерционный мутагенез и образование опухолей, изучали с помощью ряда методов, включая: 1) чувствительный анализ трансформации in vitro, 2) исследования токсичности на трансдуцированных CD34+ клетках человека, 3) исследование инсерционного паттерна в трансдуцированных мышиных клетках. и 4) долгосрочное наблюдение и вторичные исследования трансплантации на мышах. В Соединенных Штатах мы планируем зарегистрировать 5 мальчиков с классическим WAS, у которых нет подходящего родственного или неродственного донора. Параллельные исследования (не входящие в нашу заявку на получение нового исследуемого препарата) с использованием одного и того же LV, произведенного на том же предприятии Genethon, будут проводиться в Лондоне, Великобритания (5 субъектов), и Париже, Франция (5 субъектов). Основная цель будет заключаться в том, чтобы продемонстрировать выполнимость и безопасность. Второй целью будет оценка терапевтической эффективности.