Studio pilota e di fattibilità del trasferimento genico di cellule staminali ematopoietiche per la sindrome di Wiskott-Aldrich

La sindrome di Wiskott-Aldrich (WAS) (OMIM 301000) è una rara immunodeficienza legata all'X causata da mutazioni in un singolo gene, WAS, mappato su Xp11.22-Xp11.3 e codifica per la proteina della sindrome di Wiskott-Aldrich (WASP) 1. WASP è un regolatore critico della segnalazione dell'actina con espressione limitata alle cellule ematopoietiche, e quindi è richiesto per molteplici funzioni tra cui l'attivazione delle cellule T, la migrazione delle cellule dendritiche e la formazione del podosoma, e B sviluppo e funzione dei terminali cellulari. La WAS è caratterizzata da microtrombocitopenia, infezioni ricorrenti, eczema ed è associata ad un'elevata incidenza di autoimmunità e di neoplasie linfoidi. La WAS classica o grave è generalmente osservata in pazienti con mutazioni nonsenso o inserzioni/delezioni risultanti in mutazioni frameshift o del sito di giunzione o mutazioni missenso e risultanti in proteina 2 instabile. Con poche eccezioni, i pazienti WASP-negativi hanno una malattia classica. I pazienti affetti hanno un'aspettativa di vita gravemente ridotta.

Attualmente, l'unica opzione curativa per i pazienti WAS è il trapianto di cellule staminali emopoietiche (HSCT). Questo trattamento ha più successo quando è disponibile un fratello HLA-identico o un donatore non imparentato compatibile e determina la correzione della microtrombocitopenia e della disfunzione immunitaria, anche quando si verifica un chimerismo misto stabile. Tuttavia, anche i pazienti sottoposti a HSCT compatibile possono soffrire di una considerevole morbilità e mortalità a causa della malattia del trapianto contro l'ospite (GVHD) e molti pazienti non hanno un donatore HLA-identico. L'esito dell'HSCT correlato non corrispondente è costantemente scarso con una sopravvivenza di circa il 50%. Il trasferimento genico è un interessante trattamento alternativo per WAS. Il successo del trasferimento genico utilizzando HSC autologo corretto dal gene supererebbe le complicazioni cliniche legate alla GVHD e al suo trattamento. Inoltre, contrariamente all'HSCT allogenico, il trasferimento genico non sarebbe limitato dalla disponibilità di donatori compatibili. Diverse linee di evidenza indicano che la ricostituzione parziale con cellule geneticamente corrette può essere sufficiente per migliorare la malattia.

Proponiamo qui uno studio pilota e di fattibilità del trasferimento genico ex vivo utilizzando un vettore lentivirale (LV) per trasdurre CD34 + HSC autologo derivato dal midollo osseo. Le cellule saranno infuse in pazienti condizionati con chemioterapia citoriduttiva. I nostri ricercatori che collaborano in Europa hanno sviluppato un LV che codifica il cDNA WAS umano sotto il controllo del promotore WAS e pseudotipato con l'involucro della glicoproteina del virus della stomatite vescicolare (VSVg). Questo LV w1.6_hWASP_WPRE (VSVg) (abbreviato come w1.6W) ha dimostrato di essere efficace sia nei modelli preclinici in vitro che in vivo. La sicurezza, compresa la tossicità cellulare, la mutagenesi inserzionale e la formazione del tumore, è stata studiata con una serie di metodi, tra cui: 1) un saggio di trasformazione in vitro sensibile, 2) studi di tossicità in cellule CD34+ umane trasdotte, 3) esame del pattern inserzionale in cellule murine trasdotte e 4) osservazione a lungo termine e studi di trapianto secondario nei topi. Negli Stati Uniti, prevediamo di arruolare 5 ragazzi con WAS classica privi di un donatore correlato o non correlato. Studi paralleli (non nell'ambito della nostra applicazione Investigational New Drug) utilizzando lo stesso LV prodotto nella stessa struttura, Genethon, saranno condotti a Londra, Regno Unito (5 soggetti) e Parigi, Francia (5 soggetti). L'obiettivo primario sarà quello di dimostrare la fattibilità e la sicurezza. L'obiettivo secondario sarà quello di valutare l'efficacia terapeutica.