Pilotażowe i studium wykonalności transferu genów hematopoetycznych komórek macierzystych w zespole Wiskotta-Aldricha

Zespół Wiskotta-Aldricha (WAS) (OMIM 301000) to rzadki niedobór odporności sprzężony z chromosomem X, spowodowany mutacjami w pojedynczym genie, WAS, mapującym Xp11.22-Xp11.3 i kodowanie białka zespołu Wiskotta-Aldricha (WASP). rozwoju i funkcji terminali komórkowych. WAS charakteryzuje się mikrotrombocytopenią, nawracającymi infekcjami, egzemą i wiąże się z dużą częstością występowania autoimmunizacji i nowotworów układu limfatycznego. Klasyczny lub ciężki WAS jest na ogół obserwowany u pacjentów z mutacjami nonsensownymi lub insercjami/delecjami skutkującymi przesunięciem ramki odczytu lub mutacjami miejsca splicingu lub mutacjami zmiany sensu i skutkującymi niestabilnym białkiem 2. Z nielicznymi wyjątkami pacjenci z ujemnym wynikiem WASP mają klasyczną chorobę. Dotknięci pacjenci mają znacznie skróconą oczekiwaną długość życia.

Obecnie jedyną opcją wyleczenia pacjentów z WAS jest przeszczep hematopoetycznych komórek macierzystych (HSCT). To leczenie jest najbardziej skuteczne, gdy dostępne jest rodzeństwo identyczne z HLA lub dopasowany dawca niespokrewniony i skutkuje korektą mikrotrombocytopenii i dysfunkcji układu odpornościowego, nawet w przypadku wystąpienia stabilnego chimeryzmu mieszanego. Jednak nawet pacjenci poddawani dopasowanemu HSCT mogą cierpieć z powodu znacznej zachorowalności i śmiertelności z powodu choroby przeszczep przeciwko gospodarzowi (GVHD), a wielu pacjentom brakuje dawcy identycznego z HLA. Wynik niedopasowanego powiązanego HSCT jest konsekwentnie słaby, a przeżycie wynosi około 50%. Transfer genów jest atrakcyjną alternatywą leczenia WAS. Udany transfer genów przy użyciu autologicznych HSC skorygowanych genami pozwoliłby przezwyciężyć komplikacje kliniczne związane z GVHD i jej leczeniem. Ponadto, w przeciwieństwie do allogenicznego HSCT, transfer genów nie byłby ograniczony dostępnością zgodnych dawców. Kilka linii dowodów wskazuje, że częściowa rekonstytucja komórkami z korekcją genów może być wystarczająca do złagodzenia choroby.

Proponujemy tutaj badanie pilotażowe i studium wykonalności transferu genów ex vivo przy użyciu wektora lentiwirusowego (LV) do transdukcji autologicznego CD34 + HSC pochodzącego ze szpiku kostnego. Komórki zostaną podane pacjentom poddanym chemioterapii cytoredukcyjnej. Nasi współpracujący badacze w Europie opracowali LV kodujący cDNA ludzkiego WAS pod kontrolą promotora WAS i pseudotypowany z otoczką glikoproteiny pęcherzykowego zapalenia jamy ustnej (VSVg). Wykazano, że ta w1.6_hWASP_WPRE (VSVg) LV (w skrócie w1.6W) jest skuteczna zarówno w przedklinicznych modelach in vitro, jak i in vivo. Bezpieczeństwo, w tym toksyczność komórkowa, mutageneza insercyjna i powstawanie guzów, badano za pomocą szeregu metod, w tym: 1) czułego testu transformacji in vitro, 2) badań toksyczności na transdukowanych ludzkich komórkach CD34+, 3) badaniu wzorca insercji w transdukowanych komórkach mysich oraz 4) długoterminowe badania obserwacyjne i wtórne przeszczepy na myszach. W Stanach Zjednoczonych planujemy zarejestrować 5 chłopców z klasycznym WAS, którzy nie mają dopasowanego dawcy spokrewnionego lub niespokrewnionego. Równoległe badania (nie w ramach naszej aplikacji Investigational New Drug) przy użyciu tej samej LV wyprodukowanej w tej samej placówce, Genethon, zostaną przeprowadzone w Londynie w Wielkiej Brytanii (5 osób) i Paryżu we Francji (5 osób). Głównym celem będzie wykazanie wykonalności i bezpieczeństwa. Celem drugorzędnym będzie ocena skuteczności terapeutycznej.