Pilotní studie a studie proveditelnosti přenosu genu hematopoetických kmenových buněk pro Wiskott-Aldrichův syndrom

Wiskott-Aldrichův syndrom (WAS) (OMIM 301000) je vzácný X-vázaný imunodeficit způsobený mutacemi v jediném genu, WAS, mapujícím na Xp11.22-Xp11.3 a kódující protein Wiskott-Aldrichova syndromu (WASP) 1. WASP je kritickým regulátorem aktinové signalizace s expresí omezenou na hematopoetické buňky, a proto je vyžadován pro různé funkce včetně aktivace T buněk, migrace dendritických buněk a tvorby podosomů a B vývoj a funkce buněčných terminálů. WAS je charakterizována mikrotrombocytopenií, recidivujícími infekcemi, ekzémy a je spojena s vysokým výskytem autoimunity a lymfoidních malignit. Klasická nebo závažná WAS je obecně pozorována u pacientů s nesmyslnými mutacemi nebo inzercemi/delecemi, které vedou k posunu čtecího rámce nebo sestřihovým mutacím nebo missense mutacím a mají za následek nestabilní protein 2. Až na několik výjimek mají WASP-negativní pacienti klasické onemocnění. Postižení pacienti mají výrazně sníženou délku života.

V současné době je jedinou kurativní možností pro pacienty s WAS transplantace hematopoetických kmenových buněk (HSCT). Tato léčba je nejúspěšnější, když je k dispozici HLA-identický sourozenec nebo odpovídající nepříbuzný dárce, a vede ke korekci mikrotrombocytopenie a imunitní dysfunkce, i když se objeví stabilní smíšený chimérismus. Nicméně i pacienti podstupující odpovídající HSCT mohou trpět značnou morbiditou a mortalitou v důsledku reakce štěpu proti hostiteli (GVHD) a mnoho pacientů postrádá HLA-identického dárce. Výsledek neshodné související HSCT je trvale špatný s přežitím přibližně 50 %. Genový přenos je atraktivní alternativní léčbou WAS. Úspěšný genový transfer pomocí autologního genově korigovaného HSC by překonal klinické komplikace spojené s GVHD a její léčbou. Kromě toho, na rozdíl od alogenní HSCT, by přenos genů nebyl omezen dostupností kompatibilních dárců. Několik linií důkazů ukazuje, že částečná rekonstituce s genově opravenými buňkami může být dostatečná ke zlepšení onemocnění.

Navrhujeme zde pilotní studii a studii proveditelnosti ex vivo genového přenosu pomocí lentivirového vektoru (LV) k transdukci autologního CD34+ HSC odvozeného z kostní dřeně. Buňky budou podávány infuzí pacientům kondicionovaným cytoredukční chemoterapií. Naši spolupracující výzkumníci v Evropě vyvinuli LV kódující lidskou WAS cDNA pod kontrolou promotoru WAS a pseudotypizovanou s obalem glykoproteinu viru vezikulární stomatitidy (VSVg). Tento w1.6_hWASP_WPRE (VSVg) LV (zkráceně w1.6W) se ukázal jako účinný v preklinických modelech in vitro i in vivo. Bezpečnost včetně buněčné toxicity, inzerční mutageneze a tvorby nádorů byla studována řadou metod včetně: 1) citlivého transformačního testu in vitro, 2) studií toxicity na transdukovaných lidských CD34+ buňkách, 3) zkoumání inzerčního vzoru v transdukovaných myších buňkách a 4) dlouhodobé pozorování a sekundární transplantační studie u myší. Ve Spojených státech plánujeme zapsat 5 chlapců s klasickým WAS, kterým chybí odpovídající příbuzný nebo nepříbuzný dárce. Paralelní studie (ne v rámci naší aplikace Investigational New Drug) využívající stejný LV vyrobený ve stejném zařízení, Genethon, budou provedeny v Londýně, Spojeném království (5 subjektů) a Paříži ve Francii (5 subjektů). Primárním cílem bude demonstrovat proveditelnost a bezpečnost. Sekundárním cílem bude posouzení terapeutické účinnosti.