Pilot- og gennemførlighedsundersøgelse af hæmatopoietisk stamcelle-genoverførsel for Wiskott-Aldrichs syndrom

Wiskott-Aldrich syndrom (WAS) (OMIM 301000) er en sjælden X-bundet immundefekt forårsaget af mutationer i et enkelt gen, WAS, kortlægning til Xp11.22-Xp11.3 og kodning for Wiskott-Aldrich Syndrome Protein (WASP) 1. WASP er en kritisk regulator af actin-signalering med ekspression begrænset til hæmatopoietiske celler og er derfor nødvendig for flere funktioner, herunder T-celleaktivering, dendritisk cellemigration og podosomdannelse og B celleterminal udvikling og funktion. WAS er karakteriseret ved mikrotrombocytopeni, tilbagevendende infektioner, eksem og forbundet med en høj forekomst af autoimmunitet og lymfoide maligniteter. Klassisk eller svær WAS observeres generelt hos patienter med nonsens-mutationer eller insertioner/deletioner, der resulterer i frameshift- eller splejsningssted-mutationer eller missense-mutationer og resulterer i ustabilt protein 2. Med få undtagelser har WASP-negative patienter klassisk sygdom. Berørte patienter har en stærkt nedsat forventet levetid.

I øjeblikket er den eneste helbredende mulighed for WAS-patienter hæmatopoietisk stamcelletransplantation (HSCT). Denne behandling er mest vellykket, når en HLA-identisk søskende eller matchet ikke-beslægtet donor er tilgængelig og resulterer i korrektion af mikrotrombocytopeni og immundysfunktion, selv når der forekommer stabil blandet kimærisme. Men selv patienter, der gennemgår matchet HSCT, kan lide af betydelig morbiditet og dødelighed på grund af graft versus host sygdom (GVHD), og mange patienter mangler en HLA-identisk donor. Resultatet af mismatchede relateret HSCT er konsekvent dårligt med en overlevelse på ca. 50 %. Genoverførsel er en attraktiv alternativ behandling for WAS. Succesfuld genoverførsel ved hjælp af autolog gen-korrigeret HSC ville overvinde kliniske komplikationer forbundet med GVHD og dets behandling. I modsætning til allogen HSCT ville genoverførsel endvidere ikke være begrænset af tilgængeligheden af ​​kompatible donorer. Flere beviser indikerer, at delvis rekonstitution med genkorrigerede celler kan være tilstrækkelig til at lindre sygdommen.

Vi foreslår her en pilot- og gennemførlighedsundersøgelse af ex vivo genoverførsel ved hjælp af en lentiviral vektor (LV) til at transducere autolog knoglemarv afledt CD34+ HSC. Celler vil blive infunderet i patienter konditioneret med cytoreduktiv kemoterapi. Vores samarbejdende efterforskere i Europa har udviklet en LV, der koder for det humane WAS-cDNA under kontrol af WAS-promotoren og pseudotypet med Vesicular Stomatitis Virus-glycoprotein (VSVg)-kappen. Denne w1.6_hWASP_WPRE (VSVg) LV (forkortet til w1.6W) har vist sig at være effektiv i både in vitro og in vivo prækliniske modeller. Sikkerhed inklusive cellulær toksicitet, insertionsmutagenese og tumordannelse er blevet undersøgt ved en række metoder, herunder: 1) et følsomt in vitro transformationsassay, 2) toksicitetsundersøgelser i transducerede humane CD34+-celler, 3) undersøgelse af insertionsmønsteret i transducerede murine celler og 4) langtidsobservation og sekundære transplantationsundersøgelser i mus. I USA planlægger vi at tilmelde 5 drenge med klassisk WAS, som mangler en matchet relateret eller ikke-beslægtet donor. Parallelle undersøgelser (ikke under vores Investigational New Drug-ansøgning) med den samme LV produceret i samme facilitet, Genethon, vil blive udført i London, Storbritannien (5 forsøgspersoner) og Paris, Frankrig (5 forsøgspersoner). Det primære mål vil være at demonstrere gennemførlighed og sikkerhed. Det sekundære mål vil være at vurdere terapeutisk effekt.