Pilot- und Machbarkeitsstudie zum Gentransfer hämatopoetischer Stammzellen für das Wiskott-Aldrich-Syndrom

Das Wiskott-Aldrich-Syndrom (WAS) (OMIM 301000) ist eine seltene X-chromosomale Immunschwäche, die durch Mutationen in einem einzelnen Gen, WAS, verursacht wird, das auf Xp11.22-Xp11.3 kartiert und kodiert für das Wiskott-Aldrich-Syndrom-Protein (WASP) 1. WASP ist ein kritischer Regulator der Aktin-Signalübertragung, dessen Expression auf hämatopoetische Zellen beschränkt ist, und wird daher für mehrere Funktionen benötigt, einschließlich T-Zell-Aktivierung, Migration dendritischer Zellen und Podosomenbildung, und B Zellterminale Entwicklung und Funktion. WAS ist gekennzeichnet durch Mikrothrombozytopenie, rezidivierende Infektionen, Ekzeme und ist mit einer hohen Inzidenz von Autoimmunerkrankungen und lymphatischen Malignomen verbunden. Klassisches oder schweres WAS wird im Allgemeinen bei Patienten mit Nonsense-Mutationen oder Insertionen/Deletionen beobachtet, die zu Frameshift- oder Splice-Site-Mutationen oder Missense-Mutationen führen und zu einem instabilen Protein 2 führen. Mit wenigen Ausnahmen haben WASP-negative Patienten eine klassische Erkrankung. Betroffene Patienten haben eine stark reduzierte Lebenserwartung.

Derzeit ist die einzige kurative Option für WAS-Patienten die hämatopoetische Stammzelltransplantation (HSCT). Diese Behandlung ist am erfolgreichsten, wenn ein HLA-identisches Geschwister oder ein passender, nicht verwandter Spender verfügbar ist, und führt zu einer Korrektur von Mikrothrombozytopenie und Immundysfunktion, selbst wenn ein stabiler gemischter Chimärismus auftritt. Allerdings können selbst Patienten, die sich einer gematchten HSCT unterziehen, an einer beträchtlichen Morbidität und Mortalität aufgrund der Graft-versus-Host-Krankheit (GVHD) leiden, und vielen Patienten fehlt ein HLA-identischer Spender. Das Ergebnis von nicht übereinstimmenden verwandten HSCT ist durchweg schlecht mit einer Überlebensrate von etwa 50 %. Gentransfer ist eine attraktive alternative Behandlung für WAS. Ein erfolgreicher Gentransfer unter Verwendung von autologem genkorrigiertem HSC würde klinische Komplikationen im Zusammenhang mit GVHD und seiner Behandlung überwinden. Darüber hinaus wäre der Gentransfer im Gegensatz zur allogenen HSCT nicht durch die Verfügbarkeit kompatibler Spender begrenzt. Mehrere Beweislinien deuten darauf hin, dass eine teilweise Rekonstitution mit genkorrigierten Zellen ausreichend sein kann, um die Krankheit zu lindern.

Wir schlagen hier eine Pilot- und Machbarkeitsstudie zum Ex-vivo-Gentransfer unter Verwendung eines lentiviralen Vektors (LV) vor, um autologes, aus dem Knochenmark stammendes CD34+-HSC zu transduzieren. Patienten, die mit einer zytoreduktiven Chemotherapie konditioniert wurden, werden Zellen infundiert. Unsere kooperierenden Forscher in Europa haben ein LV entwickelt, das die humane WAS-cDNA unter der Kontrolle des WAS-Promotors codiert und mit der Glykoproteinhülle des Vesicular Stomatitis Virus (VSVg) pseudotypisiert ist. Dieses w1.6_hWASP_WPRE (VSVg) LV (abgekürzt als w1.6W) hat sich in präklinischen In-vitro- und In-vivo-Modellen als wirksam erwiesen. Die Sicherheit einschließlich zellulärer Toxizität, Insertionsmutagenese und Tumorbildung wurde mit einer Reihe von Methoden untersucht, darunter: 1) ein empfindlicher In-vitro-Transformationstest, 2) Toxizitätsstudien an transduzierten menschlichen CD34+-Zellen, 3) Untersuchung des Insertionsmusters in transduzierten Mauszellen und 4) Langzeitbeobachtung und sekundäre Transplantationsstudien bei Mäusen. In den Vereinigten Staaten planen wir, 5 Jungen mit klassischem WAS zu registrieren, denen ein passender verwandter oder nicht verwandter Spender fehlt. Parallele Studien (nicht unter unserem Prüfantrag für neue Arzneimittel) mit demselben LV, das in derselben Einrichtung, Genethon, hergestellt wird, werden in London, Großbritannien (5 Probanden) und Paris, Frankreich (5 Probanden) durchgeführt. Primäres Ziel wird es sein, Machbarkeit und Sicherheit zu demonstrieren. Das sekundäre Ziel wird die Beurteilung der therapeutischen Wirksamkeit sein.