Lihasproteiinisynteesinopeudet proteiinin kulutuksen jälkeen laihoilla, ylipainoisilla ja lihavilla aikuisilla

Osallistujia pyydetään ilmoittautumaan laboratorioon klo 7.00 yön yli paaston jälkeen. Saapumisen yhteydessä teflonkatetri asetetaan toisen käsivarren kyynärpäälaskimoon valtimoverinäytteitä varten ja otetaan verinäyte. Valtimoverinäytteet otetaan käärimällä koehenkilön kyynärvarsi lämmityspeittoon (45 °C) 10 minuutiksi ennen jokaista verenottoajankohtaa. Toinen teflonkatetri asetetaan vastakkaisen käsivarren kyynärpäälaskimoon, ja osallistujat saavat alkuannoksen L-[rengas-13C6]fenyylialaniinia (2,0 µmol∙kg) ennen jatkuvan L-[rengas-infuusion aloittamista. 13C6]fenyylialaniini (0,05 umol∙kg∙min) (t = -240). Ensisijainen ja jatkuva merkkiaineinfuusio johdetaan 0,2 μm:n suodattimen läpi. Veri otetaan tunnin välein ja biopsiat vastus lateralisista otetaan t = -180 ja t = -15 min käyttämällä 5 mm Bergströmin neulaa (muunnettu manuaalista imua varten) 2-prosenttisessa ksylokaiini-paikallispuudutuksessa jälkeisen imeytymisen mittaamiseksi. lihasten proteiinisynteesinopeudet. Toista biopsiaa (t = -15 min) käytetään ravinteiden tunnistamiseen ja lihasten anaboliseen signalointiin osallistuvien fosforyloitujen ja kokonaisproteiinien perustasojen määrittämiseen. Tämän jälkeen osallistujat nauttivat 6 unssia tuoretta jauhettua porsaan ulkofileetä. Tämä lihapala valittiin alhaisen lipidipitoisuuden (2,5-3 %) ja muodoltaan, kooltaan ja koostumukseltaan yhtenäisen lihan vuoksi. Nautitun sianlihan lisäksi osallistujat kuluttavat 300 ml vettä. Vettä rikastetaan 5 % merkkiaineella sianlihan ~4 % fenyylialaniinipitoisuuden mukaan. Tämä lähestymistapa on tarpeen isotooppisen vakaan tilan häiriöiden minimoimiseksi ja asianmukaisten olosuhteiden tarjoamiseksi aterian jälkeisten lihasproteiinisynteesinopeuksien laskemiseen. Sianlihan kulutukseen kuluva aika kirjataan. Sianliha-aterian ja veden valmistuminen merkitsee aterian jälkeisen vaiheen alkua (t=0). Tänä aikana valtimoverinäytteet kerätään evakuoituihin jäähdytettyihin heparinisoituihin putkiin t = 30, 60, 90, 120, 180, 240 ja 300 minuuttia. Lisää lihasbiopsioita kerätään kokeellisen infuusion t = 120 ja 300 minuutin kohdalla aterian jälkeisten lihasproteiinisynteettisten ja lihasanabolisten signaaliproteiinivasteiden mittaamiseksi. Lihasbiopsianäytteet vapautetaan näkyvästä verestä, rasvasta ja sidekudoksesta, jäädytetään nopeasti nestetypessä ja säilytetään -80 ˚C:ssa analyysiin asti. Verinäytteet sentrifugoidaan 1 000 x g 4 °C:ssa 10 minuuttia ja erotettu plasma siirretään 2,0 ml:n kryovialeihin. Plasmanäytteet säilytetään -20 ˚C:ssa jatkoanalyysiin asti.