Показатели синтеза мышечного белка после потребления белка у худых, страдающих избыточным весом и страдающих ожирением взрослых

Участников попросят явиться в лабораторию в 7:00 после ночного голодания. По прибытии в антелоктевую вену одной руки будет вставлен тефлоновый катетер для забора артериализованной крови и взят исходный образец крови. Образцы артериализованной крови будут получены путем заворачивания предплечья субъекта в нагревательное одеяло (45 ° C) на 10 минут перед каждой временной точкой сбора крови. Второй тефлоновый катетер будет вставлен в локтевую вену противоположной руки, и участники получат первичную дозу L-[кольцо-13С6]фенилаланина (2,0 мкмоль∙кг) до начала непрерывной инфузии L-[кольцо-13С6]фенилаланина. 13C6]фенилаланин (0,05 мкмоль∙кг∙мин) (t=-240). Первичная и непрерывная инфузия индикатора будет проходить через фильтр 0,2 мкм. Кровь будет собираться каждый 1 час, а биопсия латеральной широкой мышцы бедра будет собираться при t=-180 и t=-15 мин с использованием иглы Бергстрема 5 мм (модифицированной для ручного отсасывания) под местной анестезией 2% ксилокаином для измерения постабсорбтивной скорости синтеза мышечного белка. Вторая биопсия (t = -15 мин) будет использоваться для определения исходных уровней фосфорилированных и общих белков, участвующих в восприятии питательных веществ и мышечных анаболических сигналах. Впоследствии участники съедят 6 унций свежемолотой свиной вырезки по центру. Этот кусок мяса был выбран из-за его низкого содержания липидов (2,5-3%), а также однородности формы, размера и состава. Вместе с съеденной свининой участники выпивают 300 мл воды. Вода будет обогащена трассером до 5% в соответствии с содержанием фенилаланина ~4% в свинине. Этот подход необходим для минимизации нарушений изотопного стационарного состояния и обеспечения подходящих условий для расчета скорости постпрандиального синтеза мышечного белка. Время, необходимое для употребления свинины, будет записано. Завершение приема свиной муки и воды будет означать начало постпрандиальной фазы (t=0). В течение этого периода образцы артериализованной крови будут собираться в вакуумированные охлажденные гепаринизированные пробирки при t=30, 60, 90, 120, 180, 240 и 300 мин. Дополнительные биопсии мышц будут собираться при t = 120 и 300 мин экспериментальной инфузии для измерения постпрандиальных реакций синтеза мышечного белка и мышечного анаболического сигнального белка. Образцы биопсии мышц освобождают от видимой крови, жира и соединительной ткани, быстро замораживают в жидком азоте и хранят при температуре -80°C до проведения анализа. Образцы крови будут центрифугированы при 1000×g при 4°C в течение 10 минут, а отделенная плазма будет перенесена в криопробирки объемом 2,0 мл. Образцы плазмы будут храниться при температуре -20°C до дальнейшего анализа.