Tasas de síntesis de proteínas musculares después del consumo de proteínas en adultos delgados, con sobrepeso y obesos

Se les pedirá a los participantes que se presenten en el laboratorio a las 7:00 a. m. después de un ayuno nocturno. A su llegada, se insertará un catéter de teflón en una vena antecubital de un brazo para tomar muestras de sangre arterializada y se extraerá una muestra de sangre de referencia. Las muestras de sangre arterializada se obtendrán envolviendo el antebrazo de los sujetos en una manta térmica (45 °C) durante 10 minutos antes de cada punto de recogida de sangre. Se insertará un segundo catéter de teflón en una vena antecubital del brazo opuesto y los participantes recibirán una dosis inicial de L-[ring-13C6]fenilalanina (2,0 µmol∙kg) antes de iniciar una infusión continua de L-[ring- 13C6]fenilalanina (0,05 µmol∙kg∙min) (t=-240). La infusión principal y continua del trazador se pasará a través de un filtro de 0,2 μm. Se recolectará sangre cada 1 hora y se recolectarán biopsias del vasto lateral en t=-180 y t=-15 min usando una aguja Bergström de 5 mm (modificada para succión manual) bajo anestesia local con xilocaína al 2% para la medición de postabsorción. tasas de síntesis de proteínas musculares. La segunda biopsia (t=-15 min) se usará para determinar los niveles iniciales de proteínas fosforiladas y totales involucradas en la detección de nutrientes y la señalización anabólica del músculo. Posteriormente, los participantes ingerirán 6 oz de lomo de cerdo fresco molido cortado al centro. Este corte de carne fue seleccionado por su bajo contenido en lípidos (2,5-3%) y su uniformidad en forma, tamaño y composición. Junto con la carne de cerdo ingerida, los participantes consumirán 300 mL de agua. El agua se enriquecerá al 5% con trazador de acuerdo con el contenido de fenilalanina de ~4% en la carne de cerdo. Este enfoque es necesario para minimizar las alteraciones en el estado estacionario isotópico y proporcionar las condiciones adecuadas para el cálculo de las tasas de síntesis de proteínas musculares posprandiales. Se registrará el tiempo requerido para consumir la carne de cerdo. La finalización de la comida de cerdo y el agua marcará el inicio de la fase posprandial (t=0). Durante este período, las muestras de sangre arterializada se recogerán en tubos heparinizados enfriados evacuados en t = 30, 60, 90, 120, 180, 240 y 300 min. Se recolectarán biopsias musculares adicionales en t = 120 y 300 min de la infusión experimental para la medición de las respuestas de proteína de señalización muscular anabólica y sintética de proteína muscular postprandial. Las muestras de biopsia muscular se liberarán de sangre, grasa y tejido conjuntivo visibles, se congelarán rápidamente en nitrógeno líquido y se almacenarán a -80 ˚C hasta su análisis. Las muestras de sangre se centrifugarán a 1000 × g a 4 °C durante 10 min y el plasma separado se transferirá a crioviales de 2,0 ml. Las muestras de plasma se almacenarán a -20 ˚C hasta su posterior análisis.