Wskaźniki syntezy białek mięśniowych po spożyciu białka u szczupłych, z nadwagą i otyłych dorosłych

Uczestnicy zostaną poproszeni o zgłoszenie się do laboratorium o godzinie 7:00 rano po nocnym poście. Po przybyciu cewnik teflonowy zostanie wprowadzony do żyły przedłokciowej jednego ramienia w celu pobrania krwi tętniczej i pobrana zostanie wyjściowa próbka krwi. Próbki krwi arterialnej będą pobierane przez owinięcie przedramienia badanych w koc grzejny (45°C) na 10 minut przed każdym punktem czasowym pobrania krwi. Drugi cewnik teflonowy zostanie wprowadzony do żyły przedłokciowej przeciwnego ramienia, a uczestnicy otrzymają dawkę podstawową L-[ring-13C6]fenyloalaniny (2,0 µmol∙kg) przed rozpoczęciem ciągłego wlewu L-[ring- 13C6]fenyloalanina (0,05 µmol∙kg∙min) (t=-240). Pierwsza i ciągła infuzja znacznika zostanie przepuszczona przez filtr 0,2 μm. Krew będzie pobierana co 1 godzinę, a biopsje mięśnia obszernego bocznego będą pobierane w t=-180 i t=-15 min za pomocą igły Bergström 5 mm (zmodyfikowanej do ręcznego odsysania) w znieczuleniu miejscowym 2% ksylokainą w celu pomiaru poabsorpcyjnego tempo syntezy białek mięśniowych. Druga biopsja (t=-15 min) zostanie wykorzystana do określenia podstawowych poziomów fosforylowanych i całkowitych białek zaangażowanych w wykrywanie składników odżywczych i sygnalizację anaboliczną mięśni. Następnie uczestnicy spożywają 6 uncji świeżej mielonej polędwicy wieprzowej. Ten kawałek mięsa został wybrany ze względu na niską zawartość lipidów (2,5-3%) oraz jednorodność kształtu, wielkości i składu. Wraz ze spożytą wieprzowiną uczestnicy spożywają 300 ml wody. Woda zostanie wzbogacona do 5% znacznikiem zgodnie z zawartością fenyloalaniny ~4% w wieprzowinie. Takie podejście jest wymagane, aby zminimalizować zakłócenia izotopowego stanu ustalonego i zapewnić odpowiednie warunki do obliczania tempa poposiłkowej syntezy białek mięśniowych. Rejestrowany będzie czas potrzebny do spożycia wieprzowiny. Zakończenie posiłku wieprzowego i wody oznacza początek fazy poposiłkowej (t=0). W tym okresie próbki krwi arterialnej będą zbierane do próżniowo schłodzonych heparynizowanych probówek w t=30, 60, 90, 120, 180, 240 i 300 min. Dodatkowe biopsje mięśni zostaną zebrane w t=120 i 300 min eksperymentalnej infuzji w celu pomiaru poposiłkowej syntetycznej odpowiedzi białek mięśniowych i anabolicznych białek sygnałowych mięśni. Próbki biopsji mięśnia zostaną oczyszczone z widocznej krwi, tłuszczu i tkanki łącznej, szybko zamrożone w ciekłym azocie i przechowywane w temperaturze -80˚C do czasu analizy. Próbki krwi będą odwirowywane przy 1000 x gw 4˚C przez 10 min, a oddzielone osocze zostanie przeniesione do 2,0 ml fiolek kriogenicznych. Próbki osocza będą przechowywane w temperaturze -20˚C do czasu dalszej analizy.