Muskelproteinsyntestakt efter proteinkonsumtion hos magra, överviktiga och feta vuxna

Deltagarna kommer att uppmanas att rapportera till laboratoriet kl. 07.00 efter en nattfasta. Vid ankomst kommer en teflonkateter att föras in i en antecubital ven på ena armen för arterialiserad blodprovtagning och ett baslinjeblodprov kommer att tas. Arterialiserade blodprov kommer att erhållas genom att linda in försökspersonernas underarm i en värmefilt (45 °C) i 10 minuter före varje tidpunkt för bloduppsamling. En andra teflonkateter kommer att införas i en antecubital ven i motsatt arm, och deltagarna kommer att få en primingdos av L-[ring-13C6]fenylalanin (2,0 µmol∙kg) innan en kontinuerlig infusion av L-[ring- initieras 13C6]fenylalanin (0,05 µmol∙kg∙min) (t=-240). Den primära och kontinuerliga spårinfusionen kommer att passera genom ett 0,2 μm filter. Blod kommer att tas var 1:e timme och biopsier av vastus lateralis kommer att samlas in vid t=-180 och t=-15 min med en 5 mm Bergström nål (modifierad för manuell sugning) under 2% xylokain lokalbedövning för mätning av postabsorptiv muskelproteinsynteshastigheter. Den andra biopsien (t=-15 min) kommer att användas för att bestämma baslinjenivåer av fosforylerade och totala proteiner involverade i näringsavkänning och muskelanabol signalering. Därefter kommer deltagarna att få i sig 6 oz färskmald centrerad fläskkarré. Denna köttbit valdes på grund av dess låga lipidhalt (2,5-3%) och den är enhetlig i form, storlek och sammansättning. Tillsammans med det intagna fläsket kommer deltagarna att konsumera 300 ml vatten. Vattnet kommer att berikas till 5% med spårämne enligt fenylalaninhalten på ~4% i fläsket. Detta tillvägagångssätt krävs för att minimera störningar i isotopiskt steady state och tillhandahålla lämpliga förhållanden för beräkning av postprandial muskelproteinsynteshastighet. Den tid som krävs för att konsumera fläsket kommer att registreras. Slutförandet av fläskmåltiden och vattnet kommer att markera starten på den postprandiala fasen (t=0). Under denna period kommer arterialiserade blodprov att samlas in i evakuerade kylda hepariniserade rör vid t=30, 60, 90, 120, 180, 240 och 300 min. Ytterligare muskelbiopsier kommer att samlas in vid t=120 och 300 minuter efter den experimentella infusionen för mätning av postprandialt muskelproteinsyntetiskt och muskelanabola signalproteinsvar. Muskelbiopsiproverna kommer att befrias från synligt blod, fett och bindväv, frysas snabbt i flytande kväve och förvaras vid -80˚C fram till analys. Blodprover kommer att centrifugeras vid 1 000 × g vid 4 ˚C i 10 minuter och separerad plasma kommer att överföras till 2,0 ml kryoflaskor. Plasmaproverna kommer att förvaras vid -20˚C tills vidare analys.