Spiereiwitsynthesesnelheden na eiwitconsumptie bij magere, overgewicht en zwaarlijvige volwassenen

Deelnemers wordt gevraagd zich om 7.00 uur te melden bij het laboratorium na een nacht vasten. Bij aankomst wordt een Teflon-katheter ingebracht in een antecubitale ader van één arm voor arteriële bloedafname en wordt een basisbloedmonster afgenomen. Gearteriële bloedmonsters worden verkregen door de onderarm van de proefpersoon gedurende 10 minuten voorafgaand aan elk tijdstip van bloedafname in een verwarmingsdeken (45 °C) te wikkelen. Een tweede Teflon-katheter wordt ingebracht in een antecubitale ader van de andere arm en de deelnemers krijgen een voorbereidende dosis L-[ring-13C6]fenylalanine (2,0 µmol∙kg) voordat een continue infusie van L-[ring- 13C6]fenylalanine (0,05 µmol∙kg∙min) (t=-240). De primaire en continue tracer-infusie wordt door een filter van 0,2 μm geleid. Er wordt om het uur bloed afgenomen en er worden biopsieën van de vastus lateralis genomen op t=-180 en t=-15 min met behulp van een 5 mm Bergström-naald (aangepast voor handmatige afzuiging) onder lokale anesthesie van 2% xylocaïne voor het meten van postabsorptieve snelheden van spiereiwitsynthese. De tweede biopsie (t=-15 min) zal worden gebruikt om basislijnniveaus te bepalen van gefosforyleerde en totale eiwitten die betrokken zijn bij het waarnemen van voedingsstoffen en spieranabole signalering. Vervolgens nemen de deelnemers 6 oz versgemalen in het midden gesneden varkenslende in. Dit stuk vlees is geselecteerd vanwege het lage vetgehalte (2,5-3%) en uniform van vorm, grootte en samenstelling. Samen met het ingenomen varkensvlees consumeren de deelnemers 300 ml water. Het water wordt verrijkt tot 5% met tracer volgens het fenylalaninegehalte van ~4% in het varkensvlees. Deze aanpak is vereist om verstoringen in de isotopische steady-state te minimaliseren en geschikte voorwaarden te bieden voor de berekening van postprandiale spiereiwitsynthesesnelheden. De tijd die nodig is om het varkensvlees te consumeren, wordt geregistreerd. De voltooiing van de varkensmaaltijd en het water markeert het begin van de postprandiale fase (t=0). Gedurende deze periode zullen arteriële bloedmonsters worden verzameld in geëvacueerde gekoelde, gehepariniseerde buisjes op t=30, 60, 90, 120, 180, 240 en 300 minuten. Aanvullende spierbiopten zullen worden verzameld op t=120 en 300 min van de experimentele infusie voor de meting van postprandiale spiereiwitsynthese en spieranabole signaaleiwitresponsen. De spierbiopsiemonsters worden ontdaan van zichtbaar bloed, vet en bindweefsel, snel ingevroren in vloeibare stikstof en bewaard bij -80˚C tot analyse. Bloedmonsters worden gedurende 10 minuten bij 1.000 x g bij 4 °C gecentrifugeerd en het afgescheiden plasma wordt overgebracht naar cryobuisjes van 2,0 ml. De plasmamonsters worden bewaard bij -20˚C tot verdere analyse.