瘦、超重和肥胖成人摄入蛋白质后的肌肉蛋白质合成率

参与者将被要求在隔夜禁食后于上午 7:00 到实验室报告。 抵达后，特氟龙导管将插入一只手臂的肘前静脉，用于动脉化血液采样，并抽取基线血样。 在每个采血时间点之前，将受试者的前臂包裹在加热毯 (45°C) 中 10 分钟，从而获得动脉血样。 第二根聚四氟乙烯导管将插入另一只手臂的肘前静脉，参与者将在开始连续输注 L-[ring-13C6] 苯丙氨酸（2.0 µmol∙kg）之前接受启动剂量13C6]苯丙氨酸 (0.05 µmol∙kg∙min) (t=-240)。 初始和连续示踪剂输注将通过 0.2 μm 过滤器。 每 1 小时采集一次血液，并在 t=-180 和 t=-15 分钟时在 2% 赛洛卡因局部麻醉下使用 5 毫米 Bergström 针头（针对手动抽吸改良）采集股外侧肌活检，用于测量吸收后肌肉蛋白质合成率。 第二次活检（t=-15 分钟）将用于确定参与营养感应和肌肉合成代谢信号的磷酸化和总蛋白的基线水平。 随后，参与者将摄入 6 盎司新鲜磨碎的中心切猪里脊肉。 选择这块肉是因为它的脂肪含量低 (2.5-3%)，而且形状、大小和成分均匀。 与摄入的猪肉一起，参与者将消耗 300 毫升的水。 根据猪肉中约4%的苯丙氨酸含量，用示踪剂将水加至5%。 需要这种方法来尽量减少同位素稳态的干扰，并为计算餐后肌肉蛋白质合成率提供适当的条件。 将记录食用猪肉所需的时间。 猪肉粉和水的完成将标志着餐后阶段的开始 (t=0)。 在此期间，动脉血样将在 t=30、60、90、120、180、240 和 300 分钟时收集到抽空的冷冻肝素化管中。 将在实验输注的 t=120 和 300 分钟收集额外的肌肉活检，用于测量餐后肌肉蛋白质合成和肌肉合成代谢信号蛋白反应。 肌肉活检样本将去除任何可见的血液、脂肪和结缔组织，在液氮中快速冷冻并储存在 -80˚C 直至分析。 血液样本将在 4˚C 下以 1,000×g 离心 10 分钟，分离的血浆将转移到 2.0 ml 冷冻管中。 血浆样品将储存在 -20˚C 直至进一步分析。