Muskelproteinsyntheseraten nach Proteinaufnahme bei schlanken, übergewichtigen und fettleibigen Erwachsenen

Die Teilnehmer werden gebeten, sich nach einer nächtlichen Fastenzeit um 7:00 Uhr im Labor zu melden. Bei der Ankunft wird ein Teflonkatheter in eine antekubitale Vene eines Arms eingeführt, um eine arterialisierte Blutprobe zu entnehmen, und es wird eine Basisblutprobe entnommen. Arterialisierte Blutproben werden erhalten, indem der Unterarm der Probanden vor jedem Blutentnahmezeitpunkt 10 Minuten lang in eine Heizdecke (45 ° C) gewickelt wird. Ein zweiter Teflon-Katheter wird in eine antecubitale Vene des gegenüberliegenden Arms eingeführt, und die Teilnehmer erhalten eine Anfangsdosis von L-[Ring- 13C6]Phenylalanin (2,0 µmol∙kg), bevor eine kontinuierliche Infusion von L-[Ring- 13C6]Phenylalanin (0,05 µmol∙kg∙min) (t=-240). Die primäre und kontinuierliche Tracer-Infusion wird durch einen 0,2-μm-Filter geleitet. Blut wird alle 1 Stunde entnommen und Biopsien des Vastus lateralis werden bei t = –180 und t = –15 min unter Verwendung einer 5-mm-Bergström-Nadel (modifiziert für manuelles Absaugen) unter 2 % Xylocain-Lokalanästhesie zur Messung der postabsorptiven Wirkung entnommen Muskelproteinsyntheseraten. Die zweite Biopsie (t = -15 min) wird verwendet, um die Ausgangswerte von phosphorylierten und Gesamtproteinen zu bestimmen, die an der Nährstofferfassung und der anabolen Muskelsignalisierung beteiligt sind. Anschließend nehmen die Teilnehmer 6 Unzen frisch gemahlenes, in der Mitte geschnittenes Schweinelende zu sich. Dieses Fleischstück wurde aufgrund seines niedrigen Lipidgehalts (2,5-3 %) und seiner einheitlichen Form, Größe und Zusammensetzung ausgewählt. Zusammen mit dem aufgenommenen Schweinefleisch werden die Teilnehmer 300 ml Wasser zu sich nehmen. Das Wasser wird entsprechend dem Phenylalaningehalt von ~4% im Schweinefleisch auf 5% mit Tracer angereichert. Dieser Ansatz ist erforderlich, um Störungen im Isotopen-Steady-State zu minimieren und geeignete Bedingungen für die Berechnung der postprandialen Muskelproteinsyntheseraten bereitzustellen. Die Zeit, die zum Verzehr des Schweinefleischs benötigt wird, wird aufgezeichnet. Die Beendigung der Schweinefleischmahlzeit und des Wassers markiert den Beginn der postprandialen Phase (t = 0). Während dieses Zeitraums werden bei t=30, 60, 90, 120, 180, 240 und 300 min arterialisierte Blutproben in evakuierten, gekühlten, heparinisierten Röhrchen gesammelt. Zusätzliche Muskelbiopsien werden bei t = 120 und 300 min der experimentellen Infusion für die Messung der postprandialen Muskelproteinsynthetik- und muskelaufbauenden Signalproteinreaktionen entnommen. Die Muskelbiopsieproben werden von sichtbarem Blut, Fett und Bindegewebe befreit, schnell in flüssigem Stickstoff eingefroren und bis zur Analyse bei -80 °C gelagert. Die Blutproben werden bei 1.000 × g bei 4 °C für 10 Minuten zentrifugiert und das abgetrennte Plasma wird in 2,0-ml-Kryoröhrchen überführt. Die Plasmaproben werden bis zur weiteren Analyse bei -20 °C gelagert.