Tassi di sintesi proteica muscolare dopo il consumo di proteine ​​​​in adulti magri, sovrappeso e obesi

Ai partecipanti verrà chiesto di presentarsi al laboratorio alle 7:00 dopo un digiuno notturno. All'arrivo, un catetere in teflon verrà inserito in una vena antecubitale di un braccio per il prelievo di sangue arterializzato e verrà prelevato un campione di sangue di base. I campioni di sangue arterializzato saranno ottenuti avvolgendo l'avambraccio dei soggetti in una coperta riscaldante (45 °C) per 10 minuti prima di ogni momento del prelievo di sangue. Un secondo catetere in teflon verrà inserito in una vena antecubitale del braccio opposto e i partecipanti riceveranno una dose iniziale di L-[ring-13C6]fenilalanina (2,0 µmol∙kg) prima di iniziare un'infusione continua di L-[ring- 13C6]fenilalanina (0,05 µmol∙kg∙min) (t=-240). L'infusione primaria e continua del tracciante verrà fatta passare attraverso un filtro da 0,2 μm. Il sangue sarà raccolto ogni 1 ora e le biopsie del vasto laterale saranno raccolte a t=-180 e t=-15 min utilizzando un ago Bergström da 5 mm (modificato per l'aspirazione manuale) in anestesia locale con 2% di xylocaina per la misurazione del postassorbimento tassi di sintesi proteica muscolare. La seconda biopsia (t=-15 min) sarà utilizzata per determinare i livelli basali di proteine ​​fosforilate e totali coinvolte nel rilevamento dei nutrienti e nella segnalazione anabolica muscolare. Successivamente, i partecipanti ingeriranno 6 once di lonza di maiale tagliata al centro fresca. Questo taglio di carne è stato selezionato per il suo basso contenuto di lipidi (2,5-3%) ed è uniforme per forma, dimensione e composizione. Insieme al maiale ingerito, i partecipanti consumeranno 300 ml di acqua. L'acqua sarà arricchita al 5% con tracciante in base al contenuto di fenilalanina di ~ 4% nel maiale. Questo approccio è necessario per ridurre al minimo i disturbi nello stato stazionario isotopico e fornire condizioni appropriate per il calcolo dei tassi di sintesi proteica muscolare postprandiale. Verrà registrato il tempo necessario per consumare la carne di maiale. Il completamento della farina di maiale e dell'acqua segnerà l'inizio della fase postprandiale (t=0). Durante questo periodo, i campioni di sangue arterializzato saranno raccolti in tubi eparinizzati refrigerati evacuati a t=30, 60, 90, 120, 180, 240 e 300 min. Ulteriori biopsie muscolari saranno raccolte a t=120 e 300 min dell'infusione sperimentale per la misurazione delle risposte proteiche muscolari postprandiali sintetiche e di segnalazione anabolica muscolare. I campioni di biopsia muscolare saranno liberati da qualsiasi sangue visibile, grasso e tessuto connettivo, rapidamente congelati in azoto liquido e conservati a -80˚C fino all'analisi. I campioni di sangue saranno centrifugati a 1.000×g a 4˚C per 10 min e il plasma separato sarà trasferito in crioviali da 2,0 ml. I campioni di plasma saranno conservati a -20˚C fino a ulteriori analisi.