Rychlost syntézy svalových bílkovin po konzumaci bílkovin u štíhlých dospělých, dospělých s nadváhou a obezity

Účastníci budou požádáni, aby se hlásili do laboratoře v 7:00 po nočním půstu. Po příjezdu bude do předloktní žíly na jedné paži zaveden teflonový katétr pro odběr arterializované krve a bude odebrán základní vzorek krve. Arterializované vzorky krve se získají zabalením předloktí subjektů do vyhřívací přikrývky (45 °C) na 10 minut před každým časovým bodem odběru krve. Druhý teflonový katétr bude vložen do předlokální žíly na opačném rameni a účastníci dostanou primární dávku L-[ring-13C6]fenylalaninu (2,0 µmol∙kg) před zahájením kontinuální infuze L-[ring- 13C6]fenylalanin (0,05 umol∙kg∙min) (t=-240). Primární a kontinuální infuze indikátoru bude procházet přes 0,2 μm filtr. Krev bude odebírána každou 1 hodinu a biopsie vastus lateralis budou odebírány v čase t=-180 a t=-15 min pomocí 5mm Bergströmovy jehly (upravené pro ruční odsávání) pod 2% xylokainovou lokální anestezií pro měření postabsorpčního rychlost syntézy svalových bílkovin. Druhá biopsie (t=-15 min) bude použita ke stanovení výchozích hladin fosforylovaných a celkových proteinů zapojených do snímání živin a svalové anabolické signalizace. Následně účastníci zkonzumují 6 uncí čerstvé mleté ​​vepřové panenky. Tento kus masa byl vybrán pro svůj nízký obsah lipidů (2,5-3 %) a je jednotného tvaru, velikosti a složení. Spolu s požitým vepřovým masem účastníci zkonzumují 300 ml vody. Voda bude obohacena na 5 % stopovacím prostředkem podle obsahu fenylalaninu ~4 % ve vepřovém mase. Tento přístup je nutný k minimalizaci poruch v izotopovém rovnovážném stavu a poskytnutí vhodných podmínek pro výpočet postprandiálních rychlostí syntézy svalových proteinů. Zaznamená se doba potřebná ke konzumaci vepřového masa. Dokončení vepřové moučky a vody bude znamenat začátek postprandiální fáze (t=0). Během této doby budou vzorky arterializované krve odebírány do evakuovaných chlazených heparinizovaných zkumavek v t=30, 60, 90, 120, 180, 240 a 300 minutách. Další svalové biopsie budou odebírány v t=120 a 300 min experimentální infuze pro měření postprandiálních svalových proteinových syntetických a svalových anabolických signálních proteinových odpovědí. Vzorky svalové biopsie budou zbaveny jakékoli viditelné krve, tuku a pojivové tkáně, rychle zmraženy v tekutém dusíku a skladovány při -80 °C až do analýzy. Vzorky krve budou centrifugovány při 1000×g při 4˚C po dobu 10 minut a oddělená plazma bude přenesena do 2,0 ml kryozkumavek. Vzorky plazmy budou až do další analýzy skladovány při -20˚C.