Taux de synthèse des protéines musculaires après consommation de protéines chez les adultes maigres, en surpoids et obèses

Les participants seront invités à se présenter au laboratoire à 7h00 après une nuit de jeûne. À l'arrivée, un cathéter en téflon sera inséré dans une veine antécubitale d'un bras pour un prélèvement de sang artérialisé et un échantillon de sang de base sera prélevé. Des échantillons de sang artérialisés seront obtenus en enveloppant l'avant-bras des sujets dans une couverture chauffante (45 ° C) pendant 10 minutes avant chaque point de temps de prélèvement sanguin. Un deuxième cathéter en téflon sera inséré dans une veine antécubitale du bras opposé, et les participants recevront une dose d'amorçage de L-[ring- 13C6]phénylalanine (2,0 µmol∙kg) avant de commencer une perfusion continue de L-[ring- 13C6]phénylalanine (0,05 µmol∙kg∙min) (t=-240). L'infusion de traceur primaire et continue passera à travers un filtre de 0,2 μm. Le sang sera prélevé toutes les 1 heure et des biopsies du vaste externe seront prélevées à t = -180 et t = -15 min à l'aide d'une aiguille Bergström de 5 mm (modifiée pour l'aspiration manuelle) sous anesthésie locale à 2 % de xylocaïne pour la mesure de la postabsorption taux de synthèse des protéines musculaires. La deuxième biopsie (t = -15 min) sera utilisée pour déterminer les niveaux de base des protéines phosphorylées et totales impliquées dans la détection des nutriments et la signalisation anabolique musculaire. Par la suite, les participants ingéreront 6 oz de longe de porc fraîchement hachée. Cette coupe de viande a été sélectionnée en raison de sa faible teneur en lipides (2,5 à 3 %) et de sa forme, de sa taille et de sa composition uniformes. En plus du porc ingéré, les participants consommeront 300 ml d'eau. L'eau sera enrichie à 5% en traceur en fonction de la teneur en phénylalanine de ~4% dans la viande de porc. Cette approche est nécessaire pour minimiser les perturbations de l'état d'équilibre isotopique et fournir des conditions appropriées pour le calcul des taux de synthèse des protéines musculaires postprandiales. Le temps nécessaire pour consommer le porc sera enregistré. La fin du repas de porc et de l'eau marquera le début de la phase postprandiale (t = 0). Pendant cette période, des échantillons de sang artérialisé seront prélevés dans des tubes héparinés refroidis sous vide à t = 30, 60, 90, 120, 180, 240 et 300 min. Des biopsies musculaires supplémentaires seront prélevées à t = 120 et 300 min de la perfusion expérimentale pour la mesure des réponses des protéines musculaires synthétiques postprandiales et des protéines de signalisation anabolique musculaire. Les échantillons de biopsie musculaire seront débarrassés de tout sang, graisse et tissu conjonctif visibles, rapidement congelés dans de l'azote liquide et stockés à -80 °C jusqu'à l'analyse. Les échantillons de sang seront centrifugés à 1 000 x g à 4 °C pendant 10 min et le plasma séparé sera transféré dans des cryotubes de 2,0 ml. Les échantillons de plasma seront conservés à -20˚C jusqu'à une analyse plus approfondie.