Taxas de síntese de proteína muscular após o consumo de proteína em adultos magros, com sobrepeso e obesos

Os participantes serão solicitados a comparecer ao laboratório às 7:00 da manhã, após um jejum noturno. Na chegada, um cateter de Teflon será inserido em uma veia antecubital de um braço para coleta de sangue arterializado e uma amostra de sangue basal será coletada. Amostras de sangue arterial serão obtidas envolvendo o antebraço dos sujeitos em um cobertor aquecido (45 °C) por 10 minutos antes de cada ponto de coleta de sangue. Um segundo cateter de Teflon será inserido em uma veia antecubital do braço oposto, e os participantes receberão uma dose inicial de L-[ring- 13C6]fenilalanina (2,0 µmol∙kg) antes de iniciar uma infusão contínua de L-[ring- 13C6]fenilalanina (0,05 µmol∙kg∙min) (t=-240). A infusão de marcador primário e contínuo será passada através de um filtro de 0,2 μm. O sangue será coletado a cada 1 hora e as biópsias do vasto lateral serão coletadas em t=-180 e t=-15 min usando uma agulha Bergström de 5 mm (modificada para sucção manual) sob anestesia local com xilocaína a 2% para a medição do pós-absortivo taxas de síntese de proteína muscular. A segunda biópsia (t=-15 min) será usada para determinar os níveis basais de proteínas fosforiladas e totais envolvidas na detecção de nutrientes e sinalização anabólica muscular. Posteriormente, os participantes irão ingerir 6 onças de lombo de porco fresco moído. Este corte de carne foi escolhido devido ao seu baixo teor de lipídios (2,5-3%) e é uniforme em forma, tamanho e composição. Junto com a carne suína ingerida, os participantes consumirão 300 mL de água. A água será enriquecida a 5% com traçador de acordo com o teor de fenilalanina de ~4% na carne suína. Essa abordagem é necessária para minimizar os distúrbios no estado estacionário isotópico e fornecer condições apropriadas para o cálculo das taxas de síntese de proteína muscular pós-prandial. O tempo necessário para consumir a carne de porco será registrado. A finalização da refeição suína e da água marcará o início da fase pós-prandial (t=0). Durante este período, amostras de sangue arterializado serão coletadas em tubos heparinizados refrigerados a vácuo em t = 30, 60, 90, 120, 180, 240 e 300 min. Biópsias musculares adicionais serão coletadas em t = 120 e 300 min da infusão experimental para a medição das respostas pós-prandiais da proteína muscular sintética e da proteína de sinalização anabólica muscular. As amostras de biópsia muscular serão liberadas de qualquer sangue visível, gordura e tecido conjuntivo, rapidamente congeladas em nitrogênio líquido e armazenadas a -80˚C até a análise. As amostras de sangue serão centrifugadas a 1.000×g a 4˚C por 10 min e o plasma separado será transferido para criotubos de 2,0 ml. As amostras de plasma serão armazenadas a -20˚C até análise posterior.