FcyRIIIA-polymorfismin ja THPO:n ilmentymisen ja eltrombopagivasteen yhdistäminen refraktaarisilla ITP-potilailla

Immuuni trombosytopeeninen purppura (ITP) on autoimmuunisairaus, jossa verenkierrossa olevien verihiutaleiden määrän väheneminen (trombosytopenia) ilmenee verenvuototaipumuksena, helposti mustelmina (purppura) tai veren ekstravasoitumisena kapillaareista iholle ja limakalvoille (petekiat).

Henkilöillä, joilla on ITP, verihiutaleet päällystetään autovasta-aineilla verihiutaleiden kalvoantigeenejä vastaan, mikä johtaa pernan sekvestraatioon ja fagosytoosiin mononukleaaristen makrofagien toimesta. Tästä johtuva verihiutaleiden lyhentynyt elinikä verenkierrossa yhdessä epätäydellisen kompensoinnin kanssa, joka johtuu luuytimen megakaryosyyttien lisääntyneestä verihiutaleiden tuotannosta, johtaa verihiutaleiden määrän vähenemiseen.

Immuuni trombosytopeenisessa purppurassa (ITP) epänormaali autovasta-aine, yleensä immunoglobuliini G (IgG), joka on spesifinen yhdelle tai useammalle verihiutaleiden kalvon glykoproteiinille (GP), sitoutuu kiertäviin verihiutaleiden kalvoihin ja aiheuttaa kliinisesti merkittävän verihiutaleiden toimintahäiriön estämällä suoraan agonistien pääsyn verihiutaleihin. Gp-reseptorit.

Autovasta-aineella päällystetyt verihiutaleet indusoivat Fc-reseptorivälitteisen fagosytoosin mononukleaaristen makrofagien toimesta ensisijaisesti, mutta ei yksinomaan pernassa. Perna on avainelin ITP:n patofysiologiassa, ei vain siksi, että valkoisessa massassa muodostuu verihiutaleiden autovasta-aineita, vaan myös siksi, että punaisen massan mononukleaariset makrofagit tuhoavat immunoglobuliinilla päällystettyjä verihiutaleita.

FcyRIIIA:n polymorfismit on yhdistetty pernan poistoon, kortikosteroideihin ja rituksimabiin. Nykyinen tutkimus on suunniteltu tutkimaan FcyRIIIA-polymorfismien geneettisen alttiuden vaikutusta refraktaarisilla ITP-potilailla, joita hoidetaan Eltrombopagilla, sekä sytokiiniprofiilin ilmentymistä vasteen saaneissa ja ei-vasteissa.

Eltrombopaagi on pienimolekyylinen trombopoietiinireseptorin agonisti suun kautta annettavaksi. Eltrombopagi on vuorovaikutuksessa trombopoietiinireseptorin (tunnetaan myös nimellä cMpl) transmembraanisen domeenin kanssa, mikä lisää verihiutaleiden tuotantoa. Se on erityisesti tarkoitettu trombosytopenian hoitoon potilailla, joilla on krooninen immuuni (idiopaattinen) trombosytopeeninen purppura (ITP) ja joilla on riittämätön vaste. kortikosteroideihin, immunoglobuliineihin tai pernan poistoon.

Eltrombopagia toimitetaan tablettina, joka on suunniteltu annettavaksi suun kautta. Pakistanissa, jossa potilaat; jotka ovat itäaasialaisia ​​tai joilla on kohtalainen tai vaikea maksan vajaatoiminta, Eltrombopag-valmisteen suositeltu aloitusannos on 25 mg kerran vuorokaudessa. Eltrombopagia tulee säätää niin, että verihiutaleiden määrä on > 50 x 109/l, ja sitä pidetään yllä tarpeen mukaan verenvuotoriskin vähentämiseksi. Eltrombopagin vuorokausiannos ei saa ylittää 75 mg:aa.

Metodologia:

1. Verinäytteet (seerumi, plasma, DNA*) kerätään 50 kontrollilta (jota hoidetaan tavanomaisella immunosuppressiivisella hoidolla (IST) ensimmäisen ja toisen linjan hoitona) ja 25 potilaalta (resistentit steroideihin) tutkimukseen ilmoittautumisen yhteydessä (ennen 0) ja sitten peräkkäin 3 ja 6 kuukautta hoidon jälkeen.
2. Kun luuydinanalyysi on aiheellista, myös joitain luuydinnäytteitä kerätään ja tutkitaan, ja jos potilaalle tehdään pernanpoisto osana hoitoa, myös pernanäytteet otetaan ja kylmäsäilytetään.
3. Fc gamma RIIIA V158F -polymorfismi arvioidaan alleelispesifisellä PCR:llä ja/nested PCR:llä sekvenssin varmistuksen jälkeen
4. Tutkimukseen osallistuneiden genotyyppien validoimiseksi; SNP:iden suora sekvensointi tehdään automaattisella kapillaarisekvensointimenetelmällä.
5. Trombopoietiinin (THPO) ilmentyminen kvantifioidaan ennen hoitoa ja 0, 3 ja 6 kuukautta hoidon jälkeen reaaliaikaisella PCR:llä käyttämällä talonpitogeeniä (beeta-aktiini) positiivisena kontrollina refraktaarisissa ja kontrollikohteissa.
6. B-soluja tuottavien T-solujen ja anti-verihiutalevasta-aineiden (anti-GpIIbIIIa) peräkkäinen analyysi suoritetaan ennen käsittelyä ja sen jälkeen virtaussytometrian avulla T-solujen karakterisoimiseksi (TH1, TH2, TH17, TFH, Tregs-alajoukot) ja B-solut (CD19+ edustavat B-solusäätelyaineita).
7. Immuunisolut, jotka ekspressoivat sytokiinejä potilailla, joilla on villityyppiset ja mutatoidut genotyypit, mitataan sen korrelaation tutkimiseksi verihiutaleiden palautumisen kanssa reagoineissa ja ei-vasteissa käyttämällä Human Thrombopoietin Luminex Performance Assay -määritystä (R&D system Inc.; helmipohjainen multipleksimääritys Luminex®-alustalle ).
8. Löytää Fc V158F:n genotyyppijakauman yhteys THPO:n ja sytokiinien ilmentymiseen THPO-agonisteissa, jotka reagoivat ja ei reagoinut; tilastollinen analyysi suoritetaan tilasto-ohjelmalla SPSS (versio 23.0).