Sammenslutning af FcγRIIIA-polymorfi og THPO-ekspression med respons på Eltrombopag hos refraktære ITP-patienter

Immun trombocytopenisk purpura (ITP) er en autoimmun lidelse, hvor et nedsat antal cirkulerende blodplader (trombocytopeni) viser sig som en blødningstendens, let blå mærker (purpura) eller ekstravasation af blod fra kapillærer til hud og slimhinder (petekkier).

Hos personer med ITP er blodplader belagt med autoantistoffer mod blodplademembranantigener, hvilket resulterer i miltsekvestrering og fagocytose af mononukleære makrofager. Den resulterende forkortede levetid for blodplader i kredsløbet, sammen med ufuldstændig kompensation ved øget blodpladeproduktion af knoglemarvsmegakaryocytter, resulterer i et reduceret blodpladetal.

I immun trombocytopenisk purpura (ITP) binder et unormalt autoantistof, sædvanligvis immunoglobulin G (IgG) med specificitet for et eller flere blodplademembranglykoproteiner (GP'er), til cirkulerende trombocytmembraner for at inducere klinisk signifikant blodpladedysfunktion ved direkte at blokere agonisters adgang til blodplader. Gp-receptorer.

Autoantistof-coatede blodplader inducerer Fc-receptor-medieret fagocytose af mononukleære makrofager, primært, men ikke udelukkende, i milten. Milten er nøgleorganet i ITP's patofysiologi, ikke kun fordi der dannes blodpladeautoantistoffer i den hvide pulp, men også fordi mononukleære makrofager i den røde pulp ødelægger immunoglobulinovertrukne blodplader.

Polymorfier i FcγRIIIA er blevet impliceret i respons på splenektomi, kortikosteroider og rituximab. Det nuværende forsøg er designet til at undersøge virkningen af ​​genetisk disposition af FcγRIIIA polymorfismer hos refraktære ITP-patienter behandlet med Eltrombopag sammen med cytokinprofilekspression hos respondere og non-respondere.

Eltrombopag er en trombopoietinreceptoragonist med lille molekyle til oral administration. Eltrombopag interagerer med det transmembrane domæne af trombopoietin-receptoren (også kendt som cMpl), hvilket fører til øget blodpladeproduktion. Det er specifikt indiceret til behandling af trombocytopeni hos patienter med kronisk immun (idiopatisk) trombocytopenisk purpura (ITP), som har haft et utilstrækkeligt respons til kortikosteroider, immunglobuliner eller splenektomi.

Eltrombopag leveres som en tablet designet til oral administration. I Pakistan, hvor patienter; som er af østasiatisk herkomst eller som har moderat til svært nedsat leverfunktion, er den anbefalede startdosis af Eltrombopag 25 mg én gang dagligt. Eltrombopag bør justeres for at opnå og opretholde et trombocyttal >50 x 109/L efter behov for at reducere risikoen for blødning. Doseringen af ​​Eltrombopag bør ikke overstige 75 mg dagligt.

Metode:

1. Blodprøver (serum, plasma, DNA*) vil blive indsamlet fra 50 kontroller (behandlet med standard immunosuppressiv terapi (IST) som første- og andenlinjebehandling) og 25 patienter (refraktære steroider) på tidspunktet for tilmelding til forsøget (præ- behandling; 0) og derefter sekventielt 3 og 6 måneder efter behandlingen.
2. Når en marvanalyse er indiceret, vil nogle marvprøver også blive indsamlet og undersøgt, og hvis en patient skal gennemgå splenektomi som en del af behandlingen, vil miltprøver også blive indsamlet og kryokonserveret.
3. Fc gamma RIIIA V158F polymorfi vil blive vurderet ved hjælp af en allelspecifik PCR og/indlejret PCR efter sekvensverifikation
4. For at validere genotyperne af studiedeltagere; direkte sekventering af SNP'erne vil blive udført ved hjælp af automatiseret kapillær sekventeringsmetode.
5. Thrombopoietin (THPO)-ekspression vil blive kvantificeret før behandling og 0, 3 og 6 måneder efter behandling ved realtids-PCR ved brug af husholdningsgen (Beta Actin) som positiv kontrol hos de refraktære og kontrolpersoner.
6. Den sekventielle analyse af T-celler og anti-blodplade-antistoffer (anti-GpIIbIIIa), der producerer B-celler, vil blive udført før og efter behandling ved hjælp af flowcytometri for at karakterisere T-celler (TH1, TH2, TH17, TFH, Tregs undergrupper) og B-celler (CD19+ repræsenterer B-celleregulatorer).
7. Immunceller, der udtrykker cytokiner hos forsøgspersoner med vildtype og muterede genotyper, vil blive målt for at undersøge dets korrelation med blodpladegenvinding hos respondere og non-respondere ved at bruge Human Thrombopoietin Luminex performance Assay (R&D system Inc.; Bead-baseret multiplex assay til Luminex® platformen) ).
8. At finde associationen af ​​Fc V158F genotypisk fordeling med THPO og cytokinekspression i THPO agonister respondere og non-responders; statistisk analyse vil blive udført ved at bruge det statistiske program SPSS (Version 23.0) .