Związek polimorfizmu FcγRIIIA i ekspresji THPO z odpowiedzią na eltrombopag u pacjentów z oporną na leczenie małopłytkowością immunologiczną

Immunologiczna plamica małopłytkowa (ITP) jest chorobą autoimmunologiczną, w której zmniejszona liczba krążących płytek krwi (małopłytkowość) objawia się skłonnością do krwawień, łatwym powstawaniem siniaków (plamicą) lub wynaczynieniem krwi z naczyń włosowatych do skóry i błon śluzowych (wybroczyny).

U osób z ITP płytki krwi są pokryte autoprzeciwciałami przeciwko antygenom błony płytek krwi, co powoduje sekwestrację śledziony i fagocytozę przez jednojądrzaste makrofagi. Wynikające z tego skrócenie czasu życia płytek krwi w krążeniu wraz z niepełną kompensacją przez zwiększoną produkcję płytek przez megakariocyty szpiku kostnego skutkuje zmniejszeniem liczby płytek krwi.

W immunologicznej plamicy małopłytkowej (ITP) nieprawidłowe autoprzeciwciało, zwykle immunoglobulina G (IgG) specyficzna dla jednej lub więcej glikoprotein błonowych płytek krwi (GP), wiąże się z błonami krążących płytek krwi, indukując klinicznie istotną dysfunkcję płytek krwi poprzez bezpośrednie blokowanie dostępu agonistów do płytek krwi Receptory gp.

Płytki pokryte autoprzeciwciałami indukują fagocytozę za pośrednictwem receptora Fc przez makrofagi jednojądrzaste, głównie, ale nie wyłącznie, w śledzionie. Śledziona jest kluczowym narządem w patofizjologii ITP, nie tylko dlatego, że w miazdze białej tworzą się autoprzeciwciała płytkowe, ale także dlatego, że makrofagi jednojądrzaste w miazdze czerwonej niszczą płytki krwi pokryte immunoglobulinami.

Polimorfizmy w FcγRIIIA są zaangażowane w odpowiedź na splenektomię, kortykosteroidy i rytuksymab. Obecne badanie ma na celu zbadanie wpływu genetycznych predyspozycji polimorfizmów FcγRIIIA u pacjentów z oporną na leczenie pierwotną małopłytkowością immunologiczną leczonych eltrombopagiem wraz z ekspresją profilu cytokin u osób odpowiadających i niereagujących.

Eltrombopag jest drobnocząsteczkowym agonistą receptora trombopoetyny do podawania doustnego. Eltrombopag oddziałuje z domeną przezbłonową receptora trombopoetyny (znanego również jako cMpl), prowadząc do zwiększonej produkcji płytek krwi. Jest szczególnie wskazany w leczeniu trombocytopenii u pacjentów z przewlekłą immunologiczną (idiopatyczną) plamicą małopłytkową (ITP), u których odpowiedź na leczenie była niewystarczająca kortykosteroidami, immunoglobulinami lub splenektomią.

Eltrombopag jest dostępny w postaci tabletek przeznaczonych do podawania doustnego. W Pakistanie, gdzie pacjenci; pochodzenia wschodnioazjatyckiego lub z umiarkowanymi do ciężkich zaburzeniami czynności wątroby, zalecana dawka początkowa leku Eltrombopag wynosi 25 mg raz na dobę. Eltrombopag należy dostosować tak, aby osiągnąć i utrzymać liczbę płytek krwi >50 x 109/l, jeśli to konieczne, aby zmniejszyć ryzyko krwawienia. Dawka eltrombopagu nie powinna przekraczać 75 mg na dobę.

Metodologia:

1. Próbki krwi (surowica, osocze, DNA*) zostaną pobrane od 50 osób z grupy kontrolnej (leczonych standardową terapią immunosupresyjną (IST) jako leczenie pierwszego i drugiego rzutu) oraz od 25 pacjentów (opornych na steroidy) w momencie włączenia do badania (przed leczenia; 0), a następnie kolejno po 3 i 6 miesiącach od leczenia.
2. Gdy wskazana jest analiza szpiku, niektóre próbki szpiku również zostaną pobrane i zbadane, a jeśli pacjent ma zostać poddany splenektomii w ramach leczenia, zostaną również pobrane i zamrożone próbki śledziony.
3. Polimorfizm Fc gamma RIIIA V158F zostanie oceniony za pomocą PCR specyficznego dla alleli i/lub zagnieżdżonego PCR po weryfikacji sekwencji
4. W celu walidacji genotypów uczestników badania; bezpośrednie sekwencjonowanie SNP zostanie przeprowadzone za pomocą zautomatyzowanej metody sekwencjonowania kapilarnego.
5. Ekspresja trombopoetyny (THPO) będzie oznaczana ilościowo przed leczeniem oraz w 0, 3 i 6 miesięcy po leczeniu metodą PCR w czasie rzeczywistym z użyciem genu utrzymującego metabolizm (beta aktyny) jako kontroli pozytywnej u pacjentów opornych na leczenie i kontrolnych.
6. Analiza sekwencyjna limfocytów T i przeciwciał przeciwpłytkowych (anty-GpIIbIIIa) wytwarzających limfocyty B zostanie przeprowadzona przed i po leczeniu za pomocą cytometrii przepływowej w celu scharakteryzowania limfocytów T (podzbiory TH1, TH2, TH17, TFH, Tregs) oraz Limfocyty B (CD19+ reprezentujący regulatory komórek B).
7. Komórki odpornościowe eksprymujące cytokiny u osobników z genotypami typu dzikiego i zmutowanymi zostaną zmierzone w celu zbadania ich korelacji z odzyskiwaniem płytek krwi u osób reagujących i niereagujących za pomocą testu wydajności Luminex ludzkiej trombopoetyny (R&D system Inc.; test multipleksowy oparty na kulkach dla platformy Luminex® ).
8. Znalezienie związku dystrybucji genotypowej Fc V158F z THPO i ekspresją cytokin u agonistów THPO odpowiadających i niereagujących; analiza statystyczna zostanie przeprowadzona przy użyciu programu statystycznego SPSS (wersja 23.0).