Assoziation von FcγRIIIA-Polymorphismus und THPO-Expression mit der Reaktion auf Eltrombopag bei refraktären ITP-Patienten

Immunthrombozytopenische Purpura (ITP) ist eine Autoimmunerkrankung, bei der sich eine verminderte Anzahl zirkulierender Blutplättchen (Thrombozytopenie) als Blutungsneigung, leichte Blutergüsse (Purpura) oder Extravasation von Blut aus Kapillaren in Haut und Schleimhäute (Petechien) manifestiert.

Bei Personen mit ITP sind Blutplättchen mit Autoantikörpern gegen Blutplättchenmembranantigene beschichtet, was zu Milzsequestrierung und Phagozytose durch mononukleäre Makrophagen führt. Die daraus resultierende verkürzte Lebensdauer von Blutplättchen im Kreislauf führt zusammen mit einer unvollständigen Kompensation durch eine erhöhte Blutplättchenproduktion durch Megakaryozyten des Knochenmarks zu einer verringerten Blutplättchenzahl.

Bei immunthrombozytopenischer Purpura (ITP) bindet ein abnormaler Autoantikörper, normalerweise Immunglobulin G (IgG) mit Spezifität für ein oder mehrere Thrombozytenmembran-Glykoproteine ​​(GPs), an zirkulierende Thrombozytenmembranen, um eine klinisch signifikante Thrombozytendysfunktion zu induzieren, indem er direkt den Zugang von Agonisten zu Thrombozyten blockiert Gp-Rezeptoren.

Mit Autoantikörpern beschichtete Blutplättchen induzieren eine Fc-Rezeptor-vermittelte Phagozytose durch mononukleäre Makrophagen, hauptsächlich, aber nicht ausschließlich, in der Milz. Die Milz ist das Schlüsselorgan in der Pathophysiologie der ITP, nicht nur weil Thrombozyten-Autoantikörper in der weißen Pulpa gebildet werden, sondern auch weil mononukleäre Makrophagen in der roten Pulpa Immunglobulin-beschichtete Thrombozyten zerstören.

Polymorphismen in FcγRIIIA wurden mit dem Ansprechen auf Splenektomie, Kortikosteroide und Rituximab in Verbindung gebracht. Die aktuelle Studie soll die Auswirkungen der genetischen Prädisposition von FcγRIIIA-Polymorphismen bei Patienten mit refraktärer ITP, die mit Eltrombopag behandelt wurden, zusammen mit der Expression des Zytokinprofils bei Respondern und Non-Respondern untersuchen.

Eltrombopag ist ein niedermolekularer Thrombopoietin-Rezeptor-Agonist zur oralen Verabreichung. Eltrombopag interagiert mit der Transmembrandomäne des Thrombopoietin-Rezeptors (auch bekannt als cMpl), was zu einer erhöhten Thrombozytenproduktion führt. Es ist speziell angezeigt für die Behandlung von Thrombozytopenie bei Patienten mit chronischer (idiopathischer) thrombozytopenischer Purpura (ITP), die unzureichend darauf angesprochen haben zu Kortikosteroiden, Immunglobulinen oder Splenektomie.

Eltrombopag wird als Tablette zur oralen Verabreichung geliefert. In Pakistan, wo Patienten; die ostasiatischer Abstammung sind oder eine mäßige bis schwere Leberfunktionsstörung haben, beträgt die empfohlene Anfangsdosis von Eltrombopag 25 mg einmal täglich. Eltrombopag sollte nach Bedarf angepasst werden, um eine Thrombozytenzahl von > 50 x 109/l zu erreichen und aufrechtzuerhalten, um das Blutungsrisiko zu verringern. Die Dosierung von Eltrombopag sollte 75 mg täglich nicht überschreiten.

Methodik:

1. Blutproben (Serum, Plasma, DNA*) werden zum Zeitpunkt der Aufnahme in die Studie (vor der Behandlung; 0) und dann sequentiell 3 und 6 Monate nach der Behandlung.
2. Wenn eine Markanalyse angezeigt ist, werden auch einige Markproben entnommen und untersucht, und wenn sich ein Patient im Rahmen der Behandlung einer Splenektomie unterzieht, werden auch Milzproben entnommen und kryokonserviert.
3. Der Fc-Gamma-RIIIA-V158F-Polymorphismus wird nach Sequenzüberprüfung mittels allelspezifischer PCR und/nested PCR bewertet
4. Um die Genotypen der Studienteilnehmer zu validieren; Die direkte Sequenzierung der SNPs erfolgt durch eine automatisierte Kapillarsequenzierungsmethode.
5. Die Thrombopoietin (THPO)-Expression wird vor der Behandlung und 0, 3 und 6 Monate nach der Behandlung durch Echtzeit-PCR unter Verwendung des Haushaltsgens (Beta-Aktin) als positive Kontrolle bei den refraktären und Kontrollpersonen quantifiziert.
6. Die sequentielle Analyse von T-Zellen und Anti-Thrombozyten (Anti-GpIIbIIIa)-Antikörper produzierenden B-Zellen wird vor und nach der Behandlung mittels Durchflusszytometrie durchgeführt, um T-Zellen (TH1-, TH2-, TH17-, TFH-, Tregs-Untergruppen) und zu charakterisieren B-Zellen (CD19+ repräsentiert B-Zell-Regulatoren).
7. Immunzellen, die Zytokine bei Probanden mit Wildtyp- und mutierten Genotypen exprimieren, werden gemessen, um ihre Korrelation mit der Thrombozytenwiederherstellung bei Respondern und Non-Respondern zu untersuchen, indem der Human Thrombopoietin Luminex Performance Assay (R&D System Inc.; Bead-basierter Multiplex-Assay für die Luminex®-Plattform) verwendet wird ).
8. Um die Assoziation der genotypischen Verteilung von Fc V158F mit THPO und Zytokinexpression in THPO-Agonisten-Respondern und Non-Respondern zu finden; Die statistische Analyse wird mit dem Statistikprogramm SPSS (Version 23.0) durchgeführt.