Association of FcγRIIIA-polymorfism och THPO-uttryck med svar på Eltrombopag hos refraktära ITP-patienter

Immun trombocytopen purpura (ITP) är en autoimmun sjukdom där ett minskat antal cirkulerande blodplättar (trombocytopeni) visar sig som blödningstendens, lätta blåmärken (purpura) eller extravasering av blod från kapillärer till hud och slemhinnor (petekier).

Hos personer med ITP är blodplättar belagda med autoantikroppar mot blodplättsmembranantigener, vilket resulterar i mjältsekvestrering och fagocytos av mononukleära makrofager. Den resulterande förkortade livslängden för trombocyter i cirkulationen, tillsammans med ofullständig kompensation genom ökad trombocytproduktion av benmärgsmegakaryocyter, resulterar i ett minskat antal trombocyter.

I immun trombocytopen purpura (ITP) binder en onormal autoantikropp, vanligtvis immunglobulin G (IgG) med specificitet för en eller flera trombocytmembranglykoproteiner (GPs), till cirkulerande trombocytmembran för att inducera kliniskt signifikant trombocytdysfunktion genom att direkt blockera agonisternas tillgång till trombocyter. Gp-receptorer.

Autoantikroppsbelagda blodplättar inducerar Fc-receptorförmedlad fagocytos av mononukleära makrofager, primärt men inte uteslutande i mjälten. Mjälten är nyckelorganet i patofysiologin för ITP, inte bara för att trombocytautoantikroppar bildas i den vita massan, utan också för att mononukleära makrofager i den röda massan förstör immunglobulinbelagda blodplättar.

Polymorfismer i FcγRIIIA har varit inblandade i känslighet för splenektomi, kortikosteroider och rituximab. Den aktuella studien är utformad för att undersöka effekten av genetisk predisposition av FcγRIIIA-polymorfismer hos refraktära ITP-patienter som behandlats med Eltrombopag tillsammans med uttryck av cytokinprofiler hos responders och non-responders.

Eltrombopag är en trombopoietinreceptoragonist med liten molekyl för oral administrering. Eltrombopag interagerar med den transmembrana domänen av trombopoietinreceptorn (även känd som cMpl) vilket leder till ökad trombocytproduktion. Det är specifikt indicerat för behandling av trombocytopeni hos patienter med kronisk immun (idiopatisk) trombocytopenisk purpura (ITP) som har fått ett otillräckligt svar. till kortikosteroider, immunglobuliner eller splenektomi.

Eltrombopag levereras som en tablett avsedd för oral administrering. I Pakistan, där patienter; som är av östasiatisk härkomst eller som har måttligt till gravt nedsatt leverfunktion, är den rekommenderade initialdosen av Eltrombopag 25 mg en gång dagligen. Eltrombopag bör justeras för att uppnå och bibehålla ett trombocytantal >50 x 109/L vid behov för att minska risken för blödning. Doseringen av Eltrombopag bör inte överstiga 75 mg dagligen.

Metodik:

1. Blodprover (serum, plasma, DNA*) kommer att samlas in från 50 kontroller (behandlade med standard immunsuppressiv terapi (IST) som första och andra linjens behandling) och 25 patienter (refraktära steroider) vid tidpunkten för inskrivningen till prövningen (pre- behandling, 0) och sedan sekventiellt 3 och 6 månader efter behandling.
2. När en märganalys är indicerad kommer även vissa märgprover att samlas in och studeras och om en patient genomgår en mjältoperation som en del av behandlingen, kommer även mjältprover att samlas in och kryokonserveras.
3. Fc gamma RIIIA V158F polymorfism kommer att bedömas med hjälp av en allelspecifik PCR och/kapslad PCR efter sekvensverifiering
4. För att validera studiedeltagarnas genotyper; direkt sekvensering av SNP:erna kommer att göras genom automatiserad kapillärsekvenseringsmetod.
5. Uttryck av trombopoietin (THPO) kommer att kvantifieras före behandling och 0, 3 och 6 månader efter behandling genom realtids-PCR med användning av hushållsgenen (Beta Actin) som positiv kontroll hos de refraktära och kontrollpatienterna.
6. Den sekventiella analysen av T-celler och anti-blodplättsantikroppar (anti-GpIIbIIIa) som producerar B-celler kommer att utföras före och efter behandling med hjälp av flödescytometri för att karakterisera T-celler (TH1, TH2, TH17, TFH, Tregs undergrupper) och B-celler (CD19+ representerar B-cellsregulatorer).
7. Immunceller som uttrycker cytokiner hos försökspersoner med vildtyp och muterade genotyper kommer att mätas för att undersöka dess korrelation med blodplättsåtervinning hos responders och non-responders genom att använda Human Thrombopoietin Luminex Performance Assay (R&D system Inc.; Bead-baserad multiplexanalys för Luminex®-plattformen ).
8. För att hitta associationen av Fc V158F genotypisk distribution med THPO och cytokinuttryck i THPO agonister responders och non-responders; statistisk analys kommer att utföras med hjälp av statistikprogrammet SPSS (version 23.0) .