Association du polymorphisme de FcγRIIIA et de l'expression de THPO avec la réponse à l'eltrombopag chez les patients ITP réfractaires

Le purpura thrombocytopénique immunitaire (PTI) est une maladie auto-immune dans laquelle une diminution du nombre de plaquettes en circulation (thrombocytopénie) se manifeste par une tendance au saignement, des ecchymoses (purpura) ou une extravasation de sang des capillaires vers la peau et les muqueuses (pétéchies).

Chez les personnes atteintes de PTI, les plaquettes sont recouvertes d'auto-anticorps dirigés contre les antigènes de la membrane plaquettaire, entraînant une séquestration splénique et une phagocytose par les macrophages mononucléaires. La durée de vie raccourcie des plaquettes dans la circulation qui en résulte, associée à une compensation incomplète par une production accrue de plaquettes par les mégacaryocytes de la moelle osseuse, entraîne une diminution du nombre de plaquettes.

Dans le purpura thrombopénique immunologique (PTI), un auto-anticorps anormal, généralement l'immunoglobuline G (IgG) avec une spécificité pour une ou plusieurs glycoprotéines de la membrane plaquettaire (GP), se lie aux membranes plaquettaires circulantes pour induire un dysfonctionnement plaquettaire cliniquement significatif en bloquant directement l'accès des agonistes aux plaquettes. récepteurs GP.

Les plaquettes revêtues d'auto-anticorps induisent une phagocytose médiée par les récepteurs Fc par des macrophages mononucléaires, principalement mais pas exclusivement dans la rate. La rate est l'organe clé de la physiopathologie du PTI, non seulement parce que les auto-anticorps plaquettaires se forment dans la pulpe blanche, mais aussi parce que les macrophages mononucléaires de la pulpe rouge détruisent les plaquettes recouvertes d'immunoglobuline.

Les polymorphismes du FcγRIIIA ont été impliqués dans la réactivité à la splénectomie, aux corticostéroïdes et au rituximab. L'essai actuel est conçu pour étudier l'impact de la prédisposition génétique des polymorphismes FcγRIIIA chez les patients ITP réfractaires traités avec Eltrombopag ainsi que l'expression du profil des cytokines chez les répondeurs et les non-répondeurs.

Eltrombopag est une petite molécule agoniste des récepteurs de la thrombopoïétine pour administration orale. Eltrombopag interagit avec le domaine transmembranaire du récepteur de la thrombopoïétine (également connu sous le nom de cMpl) entraînant une augmentation de la production de plaquettes. Il est spécifiquement indiqué pour le traitement de la thrombocytopénie chez les patients atteints de purpura thrombocytopénique chronique immunitaire (idiopathique) qui ont eu une réponse insuffisante aux corticostéroïdes, aux immunoglobulines ou à la splénectomie.

Eltrombopag est fourni sous forme de comprimé conçu pour une administration orale. Au Pakistan, où les patients; qui sont d'ascendance est-asiatique ou qui ont une insuffisance hépatique modérée à sévère, la dose initiale recommandée d'Eltrombopag est de 25 mg une fois par jour. Eltrombopag doit être ajusté pour atteindre et maintenir une numération plaquettaire > 50 x 109/L si nécessaire afin de réduire le risque de saignement. La posologie d'Eltrombopag ne doit pas dépasser 75 mg par jour.

Méthodologie:

1. Des échantillons de sang (sérum, plasma, ADN*) seront prélevés sur 50 témoins (traités par un traitement immunosuppresseur standard (IST) en première et deuxième ligne de traitement) et 25 patients (réfractaires aux stéroïdes) au moment de l'inscription à l'essai (pré- traitement ; 0) puis séquentiellement à 3 et 6 mois après le traitement.
2. Lorsqu'une analyse de moelle est indiquée, certains échantillons de moelle seront également prélevés et étudiés et si un patient subit une splénectomie dans le cadre du traitement, des échantillons de rate seront également prélevés et cryoconservés.
3. Le polymorphisme Fc gamma RIIIA V158F sera évalué au moyen d'une PCR allèle-spécifique et/ou d'une PCR nichée après vérification de la séquence
4. Afin de valider les génotypes des participants à l'étude ; le séquençage direct des SNP sera effectué par la méthode de séquençage capillaire automatisé.
5. L'expression de la thrombopoïétine (THPO) sera quantifiée avant le traitement et à 0, 3 et 6 mois après le traitement par PCR en temps réel en utilisant le gène domestique (bêta actine) comme contrôle positif chez les sujets réfractaires et témoins.
6. L'analyse séquentielle des lymphocytes T et des anticorps anti-plaquettaires (anti-GpIIbIIIa) producteurs de lymphocytes B sera effectuée avant et après traitement par cytométrie en flux afin de caractériser les lymphocytes T (sous-ensembles TH1, TH2, TH17, TFH, Tregs) et Cellules B (CD19+ représentant les régulateurs des cellules B).
7. Les cellules immunitaires exprimant des cytokines chez des sujets de génotypes de type sauvage et mutés seront mesurées pour étudier leur corrélation avec la récupération plaquettaire chez les répondeurs et les non-répondeurs à l'aide du test de performance Human Thrombopoietin Luminex (R&D system Inc. ; test multiplex à base de billes pour la plate-forme Luminex® ).
8. Trouver l'association de la distribution génotypique du Fc V158F avec l'expression de la THPO et des cytokines chez les répondeurs et les non-répondeurs aux agonistes de la THPO ; l'analyse statistique sera effectuée à l'aide du programme statistique SPSS (version 23.0).