Asociace polymorfismu FcyRIIIA a exprese THPO s odpovědí na eltrombopag u pacientů s refrakterní ITP

Imunitní trombocytopenická purpura (ITP) je autoimunitní porucha, při které se snížený počet cirkulujících krevních destiček (trombocytopenie) projevuje sklonem ke krvácení, snadnou tvorbou modřin (purpura) nebo extravazací krve z kapilár do kůže a sliznic (petechie).

U osob s ITP jsou krevní destičky potaženy autoprotilátkami proti antigenům destičkové membrány, což vede k sekvestraci sleziny a fagocytóze mononukleárními makrofágy. Výsledná zkrácená životnost krevních destiček v oběhu spolu s neúplnou kompenzací zvýšenou tvorbou krevních destiček megakaryocyty kostní dřeně vede ke snížení počtu krevních destiček.

U imunitní trombocytopenické purpury (ITP) se abnormální autoprotilátka, obvykle imunoglobulin G (IgG) se specificitou pro jeden nebo více glykoproteinů destičkové membrány (GP), váže na membrány cirkulujících destiček a vyvolává klinicky významnou dysfunkci destiček přímým blokováním přístupu agonistů k destičkám. Gp receptory.

Destičky potažené autoprotilátkami indukují fagocytózu zprostředkovanou Fc receptorem mononukleárními makrofágy, primárně, ale ne výhradně, ve slezině. Slezina je klíčovým orgánem v patofyziologii ITP, a to nejen proto, že v bílé dřeni se tvoří destičkové autoprotilátky, ale také proto, že mononukleární makrofágy v červené dřeni ničí destičky potažené imunoglobulinem.

Polymorfismy v FcyRIIIA se podílejí na schopnosti reagovat na splenektomii, kortikosteroidy a rituximab. Současná studie je navržena tak, aby prozkoumala dopad genetické predispozice polymorfismů FcyRIIIA u pacientů s refrakterní ITP léčených Eltrombopagem spolu s expresí cytokinového profilu u respondérů a nereagujících na léčbu.

Eltrombopag je agonista trombopoetinového receptoru s malou molekulou pro perorální podání. Eltrombopag interaguje s transmembránovou doménou trombopoetinového receptoru (také známým jako cMpl), což vede ke zvýšené produkci krevních destiček. Je specificky indikován k léčbě trombocytopenie u pacientů s chronickou imunitní (idiopatická) trombocytopenická purpura (ITP), kteří měli nedostatečnou odpověď. na kortikosteroidy, imunoglobuliny nebo splenektomii.

Eltrombopag se dodává jako tableta určená k perorálnímu podání. V Pákistánu, kde pacienti; kteří jsou východoasijského původu nebo kteří mají středně těžkou až těžkou poruchu funkce jater, je doporučená počáteční dávka Eltrombopagu 25 mg jednou denně. Eltrombopag by měl být podle potřeby upraven tak, aby se dosáhlo a udrželo počet krevních destiček > 50 x 109/l, aby se snížilo riziko krvácení. Dávkování Eltrombopagu by nemělo překročit 75 mg denně.

Metodologie:

1. Vzorky krve (sérum, plazma, DNA*) budou odebrány od 50 kontrol (léčených standardní imunosupresivní terapií (IST) jako léčba první a druhé linie) a 25 pacientů (refrakterní na steroidy) v době zařazení do studie (před léčba; 0) a poté postupně 3 a 6 měsíců po léčbě.
2. Když je indikována analýza dřeně, budou také odebrány a studovány některé vzorky dřeně, a pokud pacient podstoupí splenektomii jako součást léčby, budou také odebrány a kryokonzervovány vzorky sleziny.
3. Polymorfismus Fc gama RIIIA V158F bude hodnocen pomocí alelicky specifické PCR a/nebo nested PCR po ověření sekvence
4. Za účelem ověření genotypů účastníků studie; přímé sekvenování SNP bude provedeno pomocí metody automatizovaného kapilárního sekvenování.
5. Exprese trombopoetinu (THPO) bude kvantifikována před léčbou a 0, 3 a 6 měsíců po léčbě pomocí PCR v reálném čase s použitím provozního genu (Beta Actin) jako pozitivní kontroly u refrakterních a kontrolních subjektů.
6. Sekvenční analýza T lymfocytů a antiagregačních (anti-GpIIbIIIa) protilátek produkujících B lymfocyty bude provedena před a po ošetření pomocí průtokové cytometrie za účelem charakterizace T lymfocytů (podskupiny TH1, TH2, TH17, TFH, Tregs) a B buňky (CD19+ představující regulátory B buněk).
7. Imunitní buňky exprimující cytokiny u subjektů s divokým typem a mutovanými genotypy budou měřeny, aby se prozkoumala jejich korelace s obnovou krevních destiček u respondérů a nereagujících s použitím testu výkonnosti lidského trombopoetinu Luminex (R&D system Inc.; multiplexní test založený na kuličkách pro platformu Luminex® ).
8. Najít asociaci Fc V158F genotypové distribuce s THPO a expresí cytokinů u THPO agonistů respondérů a nonresponderů; statistická analýza bude provedena pomocí statistického programu SPSS (verze 23.0).