Associatie van FcγRIIIA-polymorfisme en THPO-expressie met respons op eltrombopag bij refractaire ITP-patiënten

Immuuntrombocytopenische purpura (ITP) is een auto-immuunziekte waarbij een verminderd aantal circulerende bloedplaatjes (trombocytopenie) zich manifesteert als een neiging tot bloeden, gemakkelijk blauwe plekken krijgen (purpura) of extravasatie van bloed uit haarvaten in de huid en slijmvliezen (petechiën).

Bij personen met ITP zijn bloedplaatjes gecoat met auto-antilichamen tegen bloedplaatjesmembraanantigenen, wat resulteert in miltsekwestratie en fagocytose door mononucleaire macrofagen. De resulterende verkorte levensduur van bloedplaatjes in de bloedsomloop, samen met onvolledige compensatie door verhoogde bloedplaatjesproductie door megakaryocyten in het beenmerg, resulteert in een verminderd aantal bloedplaatjes.

Bij immuuntrombocytopenische purpura (ITP) bindt een abnormaal auto-antilichaam, meestal immunoglobuline G (IgG) met specificiteit voor een of meer bloedplaatjesmembraanglycoproteïnen (GP's), aan circulerende bloedplaatjesmembranen om klinisch significante bloedplaatjesdisfunctie te induceren door de toegang van agonisten tot bloedplaatjes direct te blokkeren Gp-receptoren.

Auto-antilichaam-gecoate bloedplaatjes induceren Fc-receptor-gemedieerde fagocytose door mononucleaire macrofagen, voornamelijk maar niet uitsluitend in de milt. De milt is het sleutelorgaan in de pathofysiologie van ITP, niet alleen omdat auto-antilichamen tegen bloedplaatjes worden gevormd in de witte pulpa, maar ook omdat mononucleaire macrofagen in de rode pulpa de met immunoglobuline gecoate bloedplaatjes vernietigen.

Polymorfismen in FcγRIIIA zijn betrokken bij de respons op splenectomie, corticosteroïden en rituximab. Het huidige onderzoek is opgezet om de impact te onderzoeken van de genetische aanleg voor FcγRIIIA-polymorfismen bij refractaire ITP-patiënten die met Eltrombopag worden behandeld, samen met de expressie van het cytokineprofiel bij responders en non-responders.

Eltrombopag is een trombopoëtinereceptoragonist met een klein molecuul voor orale toediening. Eltrombopag interageert met het transmembraandomein van de trombopoëtinereceptor (ook bekend als cMpl), wat leidt tot een verhoogde bloedplaatjesproductie. Het is specifiek geïndiceerd voor de behandeling van trombocytopenie bij patiënten met chronische immuun (idiopathische) trombocytopenische purpura (ITP) die onvoldoende hebben gereageerd corticosteroïden, immunoglobulinen of splenectomie.

Eltrombopag wordt geleverd als tablet voor orale toediening. In Pakistan, waar patiënten; die van Oost-Aziatische afkomst zijn of die een matige tot ernstige leverfunctiestoornis hebben, is de aanbevolen aanvangsdosis van Eltrombopag 25 mg eenmaal daags. Eltrombopag moet zo nodig worden aangepast om een ​​aantal bloedplaatjes >50 x 109/l te bereiken en te behouden om het risico op bloedingen te verminderen. De dosering van Eltrombopag mag niet hoger zijn dan 75 mg per dag.

Methodologie:

1. Er zullen bloedmonsters (serum, plasma, DNA*) worden afgenomen bij 50 controles (behandeld met standaard immunosuppressieve therapie (IST) als eerste- en tweedelijnsbehandeling) en 25 patiënten (steroïdenrefractair) op het moment van inschrijving voor de studie (pre- behandeling; 0) en daarna achtereenvolgens 3 en 6 maanden na de behandeling.
2. Wanneer een beenmerganalyse geïndiceerd is, zullen ook enkele beenmergmonsters worden verzameld en bestudeerd en als een patiënt een splenectomie ondergaat als onderdeel van de behandeling, zullen ook miltmonsters worden verzameld en ingevroren.
3. Fc gamma RIIIA V158F-polymorfisme zal worden beoordeeld door middel van een allelspecifieke PCR en/of geneste PCR na sequentieverificatie
4. Om de genotypen van studiedeelnemers te valideren; directe sequentiëring van de SNP's zal gebeuren via een geautomatiseerde capillaire sequentiëringsmethode.
5. De expressie van trombopoëtine (THPO) zal vóór de behandeling en op 0, 3 en 6 maanden na de behandeling worden gekwantificeerd door middel van real-time PCR met behulp van huishoudgen (Beta Actin) als positieve controle bij de refractaire en controlepersonen.
6. De sequentiële analyse van T-cellen en anti-bloedplaatjes (anti-GpIIbIIIa) antilichamen die B-cellen produceren, zal voor en na de behandeling worden uitgevoerd door middel van flowcytometrie om T-cellen (TH1, TH2, TH17, TFH, Tregs subsets) te karakteriseren en B-cellen (CD19+ vertegenwoordigt B-celregulatoren).
7. Immuuncellen die cytokines tot expressie brengen bij proefpersonen met wildtype en gemuteerde genotypen zullen worden gemeten om de correlatie met het herstel van bloedplaatjes bij responders en non-responders te onderzoeken door gebruik te maken van Human Thrombopoietin Luminex performance Assay (R&D system Inc.; Bead-based multiplex assay voor het Luminex®-platform ).
8. Het vinden van de associatie van de Fc V158F genotypische distributie met THPO en cytokine-expressie in THPO-agonisten die wel en niet reageren; statistische analyse zal worden uitgevoerd met behulp van het statistische programma SPSS (versie 23.0).