Associazione del polimorfismo FcγRIIIA e dell'espressione di THPO con la risposta a Eltrombopag nei pazienti con ITP refrattaria

La porpora trombocitopenica immunitaria (ITP) è una malattia autoimmune in cui un numero ridotto di piastrine circolanti (trombocitopenia) si manifesta con tendenza al sanguinamento, facile formazione di lividi (porpora) o stravaso di sangue dai capillari alla pelle e alle mucose (petecchie).

Nelle persone con ITP, le piastrine sono rivestite con autoanticorpi contro gli antigeni della membrana piastrinica, con conseguente sequestro splenico e fagocitosi da parte dei macrofagi mononucleari. La conseguente riduzione della durata della vita delle piastrine nella circolazione, insieme alla compensazione incompleta dovuta all'aumento della produzione di piastrine da parte dei megacariociti del midollo osseo, si traduce in una diminuzione della conta piastrinica.

Nella porpora trombocitopenica immunitaria (ITP), un autoanticorpo anomalo, solitamente immunoglobulina G (IgG) con specificità per una o più glicoproteine ​​della membrana piastrinica (GP), si lega alle membrane piastriniche circolanti per indurre una disfunzione piastrinica clinicamente significativa bloccando direttamente l'accesso degli agonisti alle piastrine Recettori Gp.

Le piastrine rivestite con autoanticorpi inducono la fagocitosi mediata dal recettore Fc da parte dei macrofagi mononucleari, principalmente ma non esclusivamente nella milza. La milza è l'organo chiave nella fisiopatologia della PTI, non solo perché gli autoanticorpi piastrinici si formano nella polpa bianca, ma anche perché i macrofagi mononucleari nella polpa rossa distruggono le piastrine rivestite di immunoglobuline.

I polimorfismi in FcγRIIIA sono stati implicati nella risposta alla splenectomia, ai corticosteroidi e al rituximab. L'attuale studio è progettato per indagare l'impatto della predisposizione genetica dei polimorfismi FcγRIIIA nei pazienti ITP refrattari trattati con Eltrombopag insieme all'espressione del profilo delle citochine nei responder e nei non responder.

Eltrombopag è un agonista del recettore della trombopoietina a piccola molecola per somministrazione orale. Eltrombopag interagisce con il dominio transmembrana del recettore della trombopoietina (noto anche come cMpl) determinando un aumento della produzione piastrinica. È specificamente indicato per il trattamento della trombocitopenia in pazienti con porpora trombocitopenica immunitaria (idiopatica) cronica (ITP) che hanno avuto una risposta insufficiente a corticosteroidi, immunoglobuline o splenectomia.

Eltrombopag è fornito in compresse progettate per la somministrazione orale. In Pakistan, dove i pazienti; che sono di discendenza dell'Asia orientale o che hanno un'insufficienza epatica da moderata a grave, la dose iniziale raccomandata di eltrombopag è di 25 mg una volta al giorno. Eltrombopag deve essere aggiustato per raggiungere e mantenere una conta piastrinica >50 x 109/L come necessario per ridurre il rischio di sanguinamento. Il dosaggio di Eltrombopag non deve superare i 75 mg al giorno.

Metodologia:

1. Saranno raccolti campioni di sangue (siero, plasma, DNA*) da 50 controlli (trattati con terapia immunosoppressiva standard (IST) come trattamento di prima e seconda linea) e 25 pazienti (refrattari agli steroidi) al momento dell'arruolamento nello studio (pre- trattamento; 0) e poi in sequenza a 3 e 6 mesi dopo il trattamento.
2. Quando è indicata un'analisi del midollo, verranno raccolti e studiati anche alcuni campioni di midollo e se un paziente viene sottoposto a splenectomia come parte del trattamento, verranno raccolti e criopreservati anche campioni di milza.
3. Il polimorfismo Fc gamma RIIIA V158F sarà valutato mediante PCR allele-specifica e/nested PCR previa verifica della sequenza
4. Al fine di convalidare i genotipi dei partecipanti allo studio; il sequenziamento diretto degli SNP sarà effettuato mediante metodo di sequenziamento capillare automatizzato.
5. L'espressione della trombopoietina (THPO) sarà quantificata prima del trattamento ea 0, 3 e 6 mesi dopo il trattamento mediante real time PCR utilizzando il gene house keeping (Beta Actin) come controllo positivo nei soggetti refrattari e di controllo.
6. L'analisi sequenziale delle cellule T e degli anticorpi antipiastrinici (anti-GpIIbIIIa) produttori di cellule B sarà eseguita prima e dopo il trattamento mediante citometria a flusso per caratterizzare le cellule T (sottoinsiemi TH1, TH2, TH17, TFH, Tregs) e Cellule B (CD19+ che rappresentano i regolatori delle cellule B).
7. Le cellule immunitarie che esprimono citochine in soggetti con genotipi wild type e mutati saranno misurate per indagare la sua correlazione con il recupero piastrinico in responder e non responder utilizzando Human Thrombopoietin Luminex performance Assay (R&D system Inc.; test multiplex basato su microsfere per la piattaforma Luminex® ).
8. Trovare l'associazione della distribuzione genotipica di Fc V158F con THPO e l'espressione di citochine in THPO agonisti responder e non responder; l'analisi statistica sarà effettuata utilizzando il programma statistico SPSS (Versione 23.0).