Associação do polimorfismo FcγRIIIA e expressão de THPO com resposta ao eltrombopag em pacientes refratários com PTI

A púrpura trombocitopênica imune (PTI) é um distúrbio autoimune no qual um número reduzido de plaquetas circulantes (trombocitopenia) se manifesta como uma tendência hemorrágica, hematomas fáceis (púrpura) ou extravasamento de sangue dos capilares para a pele e membranas mucosas (petéquias).

Em pessoas com PTI, as plaquetas são revestidas com autoanticorpos contra antígenos de membrana plaquetária, resultando em sequestro esplênico e fagocitose por macrófagos mononucleares. O tempo de vida encurtado resultante das plaquetas na circulação, juntamente com a compensação incompleta pelo aumento da produção de plaquetas pelos megacariócitos da medula óssea, resulta em uma diminuição da contagem de plaquetas.

Na púrpura trombocitopênica imune (PTI), um autoanticorpo anormal, geralmente imunoglobulina G (IgG) com especificidade para uma ou mais glicoproteínas da membrana plaquetária (GPs), liga-se às membranas plaquetárias circulantes para induzir disfunção plaquetária clinicamente significativa, bloqueando diretamente o acesso dos agonistas às plaquetas Receptores GP.

As plaquetas revestidas com autoanticorpos induzem a fagocitose mediada pelo receptor Fc por macrófagos mononucleares, principalmente, mas não exclusivamente, no baço. O baço é o órgão chave na fisiopatologia da PTI, não apenas porque os autoanticorpos plaquetários são formados na polpa branca, mas também porque os macrófagos mononucleares na polpa vermelha destroem as plaquetas revestidas com imunoglobulina.

Polimorfismos em FcγRIIIA foram implicados na capacidade de resposta à esplenectomia, corticosteróides e rituximabe. O estudo atual é projetado para investigar o impacto da predisposição genética dos polimorfismos FcγRIIIA em pacientes com PTI refratários tratados com Eltrombopag juntamente com a expressão do perfil de citocinas em respondedores e não respondedores.

O eltrombopag é um agonista do receptor de trombopoietina de pequena molécula para administração oral. O eltrombopag interage com o domínio transmembrana do receptor de trombopoietina (também conhecido como cMpl), levando ao aumento da produção de plaquetas. É especificamente indicado para o tratamento da trombocitopenia em pacientes com púrpura trombocitopênica (PTI) imune crônica (idiopática) que tiveram uma resposta insuficiente corticosteróides, imunoglobulinas ou esplenectomia.

Eltrombopag é fornecido na forma de comprimido concebido para administração oral. No Paquistão, onde os pacientes; que são descendentes do Leste Asiático ou que têm insuficiência hepática moderada a grave, a dose inicial recomendada de Eltrombopag é de 25 mg uma vez ao dia. Eltrombopag deve ser ajustado para atingir e manter uma contagem de plaquetas >50 x 109/L conforme necessário para reduzir o risco de sangramento. A dosagem de Eltrombopag não deve exceder 75 mg por dia.

Metodologia:

1. Amostras de sangue (soro, plasma, DNA*) serão coletadas de 50 controles (tratados com terapia imunossupressora padrão (IST) como tratamento de primeira e segunda linha) e 25 pacientes (refratários a esteróides) no momento da inscrição no estudo (pré- tratamento; 0) e então sequencialmente aos 3 e 6 meses após o tratamento.
2. Quando uma análise de medula é indicada, algumas amostras de medula também serão coletadas e estudadas e, se um paciente for submetido a esplenectomia como parte do tratamento, amostras de baço também serão coletadas e criopreservadas.
3. O polimorfismo Fc gama RIIIA V158F será avaliado por meio de PCR alelo-específico e/nested PCR após verificação da sequência
4. A fim de validar os genótipos dos participantes do estudo; o sequenciamento direto dos SNPs será feito através do método de sequenciamento capilar automatizado.
5. A expressão de trombopoietina (THPO) será quantificada antes do tratamento e aos 0, 3 e 6 meses após o tratamento por PCR em tempo real usando o gene housekeeping (Beta Actin) como controle positivo nos indivíduos refratários e controles.
6. A análise sequencial de células T e anticorpos antiplaquetários (anti-GpIIbIIIa) produtores de células B será realizada antes e após o tratamento por meio de citometria de fluxo, a fim de caracterizar as células T (subconjuntos TH1, TH2, TH17, TFH, Tregs) e Células B (CD19+ representando reguladores de células B).
7. Células imunes que expressam citocinas em indivíduos com genótipos de tipo selvagem e mutantes serão medidas para investigar sua correlação com a recuperação de plaquetas em respondedores e não respondedores usando o Ensaio de desempenho Human Thrombopoietin Luminex (R&D system Inc.; Ensaio multiplex baseado em esferas para a plataforma Luminex® ).
8. Encontrar a associação da distribuição genotípica de Fc V158F com THPO e expressão de citocinas em respondedores e não respondedores de agonistas de THPO; a análise estatística será realizada por meio do programa estatístico SPSS (Versão 23.0).