Association of FcγRIIIA-polymorfisme og THPO-ekspresjon med respons på Eltrombopag hos refraktære ITP-pasienter

Immun trombocytopenisk purpura (ITP) er en autoimmun lidelse der et redusert antall sirkulerende blodplater (trombocytopeni) viser seg som en blødningstendens, lett blåmerker (purpura) eller ekstravasering av blod fra kapillærer til hud og slimhinner (petekkier).

Hos personer med ITP er blodplater belagt med autoantistoffer mot blodplatemembranantigener, noe som resulterer i miltsekvestrering og fagocytose av mononukleære makrofager. Den resulterende forkortede levetiden til blodplater i sirkulasjonen, sammen med ufullstendig kompensasjon ved økt blodplateproduksjon av benmargsmegakaryocytter, resulterer i et redusert antall blodplater.

Ved immun trombocytopenisk purpura (ITP) binder et unormalt autoantistoff, vanligvis immunglobulin G (IgG) med spesifisitet for ett eller flere blodplatemembranglykoproteiner (GPs), til sirkulerende blodplatemembraner for å indusere klinisk signifikant blodplatedysfunksjon ved direkte å blokkere agonisters tilgang til blodplater. Gp-reseptorer.

Autoantistoffbelagte blodplater induserer Fc-reseptormediert fagocytose av mononukleære makrofager, primært, men ikke utelukkende, i milten. Milten er nøkkelorganet i patofysiologien til ITP, ikke bare fordi det dannes blodplateautoantistoffer i den hvite massen, men også fordi mononukleære makrofager i den røde massen ødelegger immunglobulinbelagte blodplater.

Polymorfismer i FcγRIIIA har vært involvert i respons på splenektomi, kortikosteroider og rituximab. Nåværende studie er designet for å undersøke virkningen av genetisk predisposisjon av FcγRIIIA-polymorfismer hos refraktære ITP-pasienter behandlet med Eltrombopag sammen med uttrykk av cytokinprofil hos respondere og ikke-responderende.

Eltrombopag er en trombopoietinreseptoragonist med liten molekyl for oral administrering. Eltrombopag interagerer med det transmembrane domenet til trombopoietinreseptoren (også kjent som cMpl) og fører til økt blodplateproduksjon. Det er spesifikt indisert for behandling av trombocytopeni hos pasienter med kronisk immun (idiopatisk) trombocytopenisk purpura (ITP) som har hatt utilstrekkelig respons til kortikosteroider, immunglobuliner eller splenektomi.

Eltrombopag leveres som en tablett designet for oral administrering. I Pakistan, hvor pasienter; som er av østasiatiske aner eller som har moderat til alvorlig nedsatt leverfunksjon, er den anbefalte startdosen av Eltrombopag 25 mg én gang daglig. Eltrombopag bør justeres for å oppnå og opprettholde et blodplateantall >50 x 109/L etter behov for å redusere risikoen for blødning. Doseringen av Eltrombopag bør ikke overstige 75 mg daglig.

Metodikk:

1. Blodprøver (serum, plasma, DNA*) vil bli samlet inn fra 50 kontroller (behandlet med standard immunsuppressiv terapi (IST) som første- og andrelinjebehandling) og 25 pasienter (refraktære steroider) på tidspunktet for registrering til studien (pre- behandling; 0) og deretter sekvensielt 3 og 6 måneder etter behandling.
2. Når en marganalyse er indisert, vil noen margprøver også bli samlet inn og studert, og hvis en pasient skal gjennomgå splenektomi som en del av behandlingen, vil miltprøver også bli samlet inn og kryokonservert.
3. Fc gamma RIIIA V158F polymorfisme vil bli vurdert ved hjelp av en allelspesifikk PCR og/nested PCR etter sekvensverifisering
4. For å validere genotypene til studiedeltakerne; direkte sekvensering av SNP-ene vil bli gjort gjennom automatisert kapillærsekvenseringsmetode.
5. Trombopoietin (THPO)-ekspresjon vil kvantifiseres før behandling og 0, 3 og 6 måneder etter behandling ved sanntids-PCR ved bruk av husholdningsgen (Beta Actin) som positiv kontroll hos de refraktære og kontrollpersonene.
6. Den sekvensielle analysen av T-celler og anti-blodplate-antistoffer (anti-GpIIbIIIa) som produserer B-celler vil bli utført før og etter behandling ved hjelp av flowcytometri for å karakterisere T-celler (TH1, TH2, TH17, TFH, Tregs undergrupper) og B-celler (CD19+ representerer B-celleregulatorer).
7. Immunceller som uttrykker cytokiner hos personer med villtype og muterte genotyper vil bli målt for å undersøke korrelasjonen med blodplategjenoppretting hos respondere og ikke-responderere ved å bruke Human Thrombopoietin Luminex Performance Assay (R&D system Inc.; Bead-basert multipleksanalyse for Luminex®-plattformen ).
8. For å finne assosiasjonen av Fc V158F genotypisk distribusjon med THPO og cytokinekspresjon i THPO agonister respondere og nonresponders; statistisk analyse vil bli utført ved bruk av statistisk program SPSS (versjon 23.0) .