Связь полиморфизма FcγRIIIA и экспрессии THPO с реакцией на элтромбопаг у пациентов с рефрактерной ИТП

Иммунная тромбоцитопеническая пурпура (ИТП) представляет собой аутоиммунное заболевание, при котором сниженное количество циркулирующих тромбоцитов (тромбоцитопения) проявляется склонностью к кровотечениям, легкими кровоподтеками (пурпура) или просачиванием крови из капилляров в кожу и слизистые оболочки (петехии).

У лиц с ИТП тромбоциты покрыты аутоантителами к антигенам мембран тромбоцитов, что приводит к секвестрации селезенки и фагоцитозу мононуклеарными макрофагами. В результате сокращается продолжительность жизни тромбоцитов в кровотоке вместе с неполной компенсацией повышенной продукцией тромбоцитов мегакариоцитами костного мозга, что приводит к снижению количества тромбоцитов.

При иммунной тромбоцитопенической пурпуре (ИТП) аномальные аутоантитела, обычно иммуноглобулин G (IgG) со специфичностью к одному или нескольким гликопротеинам мембран тромбоцитов (GP), связываются с циркулирующими мембранами тромбоцитов, вызывая клинически значимую дисфункцию тромбоцитов путем прямого блокирования доступа агонистов к тромбоцитам. Рецепторы ГП.

Тромбоциты, покрытые аутоантителами, индуцируют опосредованный рецептором Fc фагоцитоз мононуклеарными макрофагами, преимущественно, но не исключительно, в селезенке. Селезенка является ключевым органом в патофизиологии ИТП не только потому, что в белой пульпе образуются аутоантитела к тромбоцитам, но и потому, что мононуклеарные макрофаги в красной пульпе разрушают тромбоциты, покрытые иммуноглобулинами.

Полиморфизмы FcγRIIIA связаны с реакцией на спленэктомию, кортикостероиды и ритуксимаб. Текущее исследование предназначено для изучения влияния генетической предрасположенности полиморфизмов FcγRIIIA у пациентов с рефрактерной ИТП, получавших элтромбопаг, наряду с экспрессией профиля цитокинов у респондеров и нереспондеров.

Элтромбопаг представляет собой низкомолекулярный агонист рецепторов тромбопоэтина для перорального применения. Элтромбопаг взаимодействует с трансмембранным доменом рецептора тромбопоэтина (также известного как cMpl), что приводит к увеличению продукции тромбоцитов. Он специально показан для лечения тромбоцитопении у пациентов с хронической иммунной (идиопатической) тромбоцитопенической пурпурой (ИТП), у которых был недостаточный ответ. кортикостероиды, иммуноглобулины или спленэктомия.

Элтромбопаг выпускается в виде таблеток, предназначенных для приема внутрь. В Пакистане, где больные; лицам восточноазиатского происхождения или с печеночной недостаточностью средней и тяжелой степени рекомендуемая начальная доза элтромбопага составляет 25 мг 1 раз в сутки. Элтромбопаг следует корректировать для достижения и поддержания количества тромбоцитов >50 x 109/л, если это необходимо для снижения риска кровотечения. Дозировка элтромбопага не должна превышать 75 мг в сутки.

Методология:

1. Образцы крови (сыворотка, плазма, ДНК*) будут взяты у 50 контрольных пациентов (леченных стандартной иммуносупрессивной терапией (ИСТ) в качестве терапии первой и второй линии) и у 25 пациентов (резистентных к стероидам) во время включения в исследование (до лечение; 0), а затем последовательно через 3 и 6 месяцев после лечения.
2. Когда показан анализ костного мозга, некоторые образцы костного мозга также будут собраны и исследованы, а если пациент подвергается спленэктомии в рамках лечения, образцы селезенки также будут собраны и криоконсервированы.
3. Полиморфизм Fc гамма RIIIA V158F будет оцениваться с помощью аллель-специфической ПЦР и/или вложенной ПЦР после проверки последовательности.
4. Для подтверждения генотипов участников исследования; прямое секвенирование SNP будет проводиться с помощью метода автоматического капиллярного секвенирования.
5. Экспрессию тромбопоэтина (THPO) будут количественно определять до лечения и через 0, 3 и 6 месяцев после лечения с помощью ПЦР в реальном времени с использованием гена домашнего хозяйства (бета-актин) в качестве положительного контроля у рефрактерных и контрольных субъектов.
6. Последовательный анализ Т-клеток и антитромбоцитарных (анти-GpIIbIIIa) антител, продуцирующих В-клетки, будет проводиться до и после лечения с помощью проточной цитометрии, чтобы охарактеризовать Т-клетки (подмножества TH1, TH2, TH17, TFH, Tregs) и В-клетки (CD19+ представляет собой регуляторы В-клеток).
7. Иммунные клетки, экспрессирующие цитокины, у субъектов с генотипами дикого типа и мутантными генотипами будут измеряться для изучения их корреляции с восстановлением тромбоцитов у респондеров и нереспондеров с помощью анализа производительности Human Thrombopoietin Luminex (R&D system Inc.; мультиплексный анализ на основе шариков для платформы Luminex®). ).
8. Найти связь генотипического распределения Fc V158F с THPO и экспрессией цитокинов у респондеров и нереспондеров агонистов THPO; статистический анализ будет выполняться с использованием статистической программы SPSS (версия 23.0).