Asociación del polimorfismo de FcγRIIIA y la expresión de THPO con la respuesta a eltrombopag en pacientes con PTI refractaria

La púrpura trombocitopénica inmune (PTI) es un trastorno autoinmune en el que una disminución del número de plaquetas circulantes (trombocitopenia) se manifiesta como una tendencia al sangrado, aparición fácil de hematomas (púrpura) o extravasación de sangre de los capilares a la piel y las membranas mucosas (petequias).

En las personas con PTI, las plaquetas están recubiertas de autoanticuerpos contra los antígenos de la membrana plaquetaria, lo que provoca el secuestro del bazo y la fagocitosis por macrófagos mononucleares. La vida útil más corta resultante de las plaquetas en la circulación, junto con la compensación incompleta por el aumento de la producción de plaquetas por parte de los megacariocitos de la médula ósea, da como resultado una disminución del recuento de plaquetas.

En la púrpura trombocitopénica inmunitaria (PTI), un autoanticuerpo anormal, generalmente inmunoglobulina G (IgG) con especificidad por una o más glicoproteínas de la membrana plaquetaria (GP), se une a las membranas plaquetarias circulantes para inducir una disfunción plaquetaria clínicamente significativa al bloquear directamente el acceso de los agonistas a las plaquetas. receptores gp.

Las plaquetas recubiertas de autoanticuerpos inducen la fagocitosis mediada por el receptor Fc por macrófagos mononucleares, principalmente, pero no exclusivamente, en el bazo. El bazo es el órgano clave en la fisiopatología de la PTI, no solo porque los autoanticuerpos plaquetarios se forman en la pulpa blanca, sino también porque los macrófagos mononucleares en la pulpa roja destruyen las plaquetas recubiertas de inmunoglobulina.

Los polimorfismos en FcγRIIIA se han implicado en la respuesta a la esplenectomía, los corticosteroides y el rituximab. El ensayo actual está diseñado para investigar el impacto de la predisposición genética de los polimorfismos FcγRIIIA en pacientes con PTI refractaria tratados con Eltrombopag junto con la expresión del perfil de citoquinas en respondedores y no respondedores.

Eltrombopag es un agonista del receptor de trombopoyetina de molécula pequeña para administración oral. Eltrombopag interactúa con el dominio transmembrana del receptor de trombopoyetina (también conocido como cMpl), lo que aumenta la producción de plaquetas. Está específicamente indicado para el tratamiento de la trombocitopenia en pacientes con púrpura trombocitopénica inmune (idiopática) crónica (PTI) que han tenido una respuesta insuficiente. a corticoides, inmunoglobulinas o esplenectomía.

Eltrombopag se presenta en comprimidos diseñados para administración oral. En Pakistán, donde los pacientes; que son de ascendencia asiática oriental o que tienen insuficiencia hepática de moderada a grave, la dosis inicial recomendada de eltrombopag es de 25 mg una vez al día. Eltrombopag debe ajustarse para lograr y mantener un recuento de plaquetas >50 x 109/l según sea necesario para reducir el riesgo de hemorragia. La dosificación de Eltrombopag no debe exceder los 75 mg diarios.

Metodología:

1. Se recolectarán muestras de sangre (suero, plasma, ADN*) de 50 controles (tratados con terapia inmunosupresora estándar (IST) como tratamiento de primera y segunda línea) y 25 pacientes (resistentes a los esteroides) en el momento de la inscripción en el ensayo (pre- tratamiento; 0) y luego secuencialmente a los 3 y 6 meses después del tratamiento.
2. Cuando se indica un análisis de médula, también se recolectarán y estudiarán algunas muestras de médula y, si un paciente se somete a una esplenectomía como parte del tratamiento, también se recolectarán y crioconservarán muestras de bazo.
3. El polimorfismo Fc gamma RIIIA V158F se evaluará mediante una PCR específica de alelo y/o una PCR anidada después de la verificación de la secuencia.
4. Con el fin de validar los genotipos de los participantes del estudio; la secuenciación directa de los SNP se realizará a través del método de secuenciación capilar automatizado.
5. La expresión de trombopoyetina (THPO) se cuantificará antes del tratamiento y a los 0, 3 y 6 meses después del tratamiento mediante PCR en tiempo real utilizando el gen housekeeping (Beta actina) como control positivo en los sujetos refractarios y de control.
6. El análisis secuencial de células T y anticuerpos antiplaquetarios (anti-GpIIbIIIa) productores de células B se realizará antes y después del tratamiento mediante citometría de flujo para caracterizar las células T (subconjuntos TH1, TH2, TH17, TFH, Tregs) y Células B (CD19+ que representan reguladores de células B).
7. Se medirán las células inmunitarias que expresan citoquinas en sujetos con genotipos de tipo salvaje y mutados para investigar su correlación con la recuperación de plaquetas en respondedores y no respondedores mediante el uso del ensayo de rendimiento Luminex de trombopoyetina humana (R&D system Inc.; ensayo multiplex basado en perlas para la plataforma Luminex® ).
8. Encontrar la asociación de la distribución genotípica de Fc V158F con la expresión de THPO y citoquinas en respondedores y no respondedores de agonistas de THPO; El análisis estadístico se realizará utilizando el programa estadístico SPSS (Versión 23.0).