Hengitysteiden syntiaaliviruksen emissiomallit

Tutkimuksen suunnittelu ja menetelmät Tämän tutkimuksen päätavoitteena on tunnistaa ja määrittää RSV:n ilmassa kulkeutuva emissio ja myöhemmät pintakuormitusmallit luonnollisesti tartunnan saaneilla potilailla.

Potilastiedot:

Päivystyspoliklinikalla (ED) nähdyt potilaat, jotka on otettu sairaalaan hengitystieoireiden takia ja joilla on diagnosoitu RSV, voivat ilmoittautua mukaan. Potilaiden tunnistamiseen käytetään rutiininomaisten sisäisten laboratoriodiagnostisten testien, kuten Respiratory Viral Panel (RVP) -testien tuloksia.

Asetus:

Wake Forest Baptist Medical Center (WFBMC) on 885 vuoteen korkea-asteen hoitosairaala. Vuodessa on noin 36 000 sairaalahoitoa ja yli 89 000 ED-käyntiä (lasten/aikuisten). Ilmanäytteenotto suoritetaan potilashuoneissa pyörteillä ilmavirroilla (6 ilmanvaihtoa yhteensä/tunti) noin 20°C lämpötilassa ja 40 % suhteellisessa kosteudessa. Ilma suodatetaan ANSI/ASHRAE 52.2 -yhteensopivilla loppusuodattimilla, joiden tehokkuusraportointiarvo on vähintään 15.

Näytteenotto:

Jokaiselta koehenkilöltä otetaan yksi nenänielun vanupuikko. Näytettä käytetään RSV-tartunnan vahvistamiseen ja yksilön kantaman taudinaiheuttajan määrän määrittämiseen. Näytteet inokuloidaan Becton Dickinson Universal Viral Transport Systemiin (VTM, BD Diagnostics, Franklin Lakes, NJ) reaaliaikaista käänteiskopioija-PCR (rRT-PCR) -analyysiä varten.

Kertaluonteiset ilmanäytteet kerätään käyttämällä kuusivaiheisia Andersen-ilmanäytteenottolaitteita ja asetetaan levyt kolmeen paikkaan, sängyn/tuolin päähän kahden jalan päässä potilaan päästä, sängyn/tuolin jaloista kahdeksan jalan päässä päästä ja uloskäynnin yhteydessä. potilashuoneesta (11):

Näytteet kerätään viruskuljetusalustaan ​​(VTM), täydennettynä RNA:n stabilointipuskurilla (Qiagen AVL -puskuri) ja kantaja-RNA:lla ja säilytetään sitten -80 °C:ssa. Kantaja-RNA toimii sekä kantajana että sisäisenä kontrollina sisältämällä kasvin tupakan mosaiikkiviruksen genomisen RNA:n. 540 ul:n tilavuus RNA-näytettä puhdistetaan QIAmp Viral RNA Mini Extraction Kit -pakkauksella ja konsentroidaan noin 10-kertaiseksi. RSV-serotyypit A ja B sekä kontrolliviruksen tupakan mosaiikkiviruksen RNA havaitaan käänteistranskriptiolla ja kvantitatiivisella PCR:llä. Lisäksi nNenänielun vanupuikkoa voidaan käyttää myös viljelmille, jotka on inokuloitu petrimaljalla, joka sisältää RSV-spesifistä väliainetta.

RSV:n pintakuormitus arvioidaan sijoittamalla VTM:llä täytetyt avoimen standardin petrimaljat kolmeen ilmanäytteenottopaikkaan. Petrimaljojen kannet poistetaan ilmanäytteenoton alussa ja suljetaan sen jälkeen. Valituilta ympäristöpinnoilta otetaan näytteet steriileillä vanupuikoilla, jotka on kostutettu VTM- tai TSB-liemellä. Kahden neliötuuman alue pyyhkäistään kerran kolmesta kosketuspisteestä päivittäin: sängyn käsikaiteen pää, ruokatarjottimen pöydän keskellä ja pöytä/vaakasuora pinta huoneen takaosassa (noin 10 metrin päässä sängyn jalkaterän jälkeen). . Vanupuikkoja vorteksoidaan 30 sekuntia ja käsitellään kuten on kuvattu RSV:n havaitsemiseksi ilmanäytteistä.

Näytteenoton aikana terveydenhuollon ammattihenkilö (HCP) ja tutkimushenkilöstö käyttävät hengityssuojaimia (N-95) vähentääkseen mahdollisen RSV-kantajastatuksen aiheuttamaa ulkoisen kontaminaation riskiä. Hengityssuojaimet kerätään ja hengityssuojaimesta leikataan kahden neliötuuman keskiosa steriileillä saksilla. Leikkaukset asetetaan 2 ml:n VTM- tai TSB-liemeen ja pakastetaan. Sulatuksen jälkeen näytteitä vorteksoidaan/sekoitetaan ja niitä käsitellään edelleen RSV-näytteiden kohdalla kuvatulla tavalla.