Emisjonsmønstre av respiratorisk syncytialvirus

Forskningsdesign og -metoder Hovedmålet med denne studien er å identifisere og bestemme luftbåren utslipp og påfølgende overflatebelastningsmønstre av RSV hos naturlig infiserte pasienter.

Pasientinformasjon:

Pasienter som blir sett på akuttmottaket (ED) eller innlagt på sykehus med luftveissymptomer og diagnostisert med RSV er kvalifisert for innmelding. Resultatene av rutinemessige laboratoriediagnostiske tester som Respiratory Viral Panel (RVP) vil bli brukt til å identifisere pasienter.

Innstilling:

Wake forest baptist Medical Center (WFBMC) er et 885-sengers sykehus for tertiær omsorg. Det er ca. 36 000 innleggelser på sykehus og >89 000 akuttmottak årlig (pediatrisk/voksen). Luftprøvetaking utføres i pasientrom under turbulente luftstrømmer (6 totale luftskifter/time) ved ca. 20°C temperatur og 40 % relativ luftfuktighet. Luft filtreres av ANSI/ASHRAE 52.2-kompatible endefiltre med en minimumsverdi for effektivitetsrapportering på 15.

Sampling:

En nasofaryngeal vattpinne vil bli hentet fra hvert individ. Prøven vil bli brukt til å bekrefte RSV-infeksjon og bestemme mengden av patogenet som bæres av individet. Prøver vil bli inokulert i Becton Dickinson Universal Viral Transport System (VTM, BD Diagnostics, Franklin Lakes, NJ) for sanntids revers transkriptase PCR (rRT-PCR) analyse.

Engangsluftprøver vil bli samlet inn ved bruk av seks-trinns Andersen luftprøvetakingsanordninger og sette plater på tre steder, sengehode/stol to fot fra pasienthodet, foten av sengen/stol åtte fot fra hodet, og ved utgangen av pasientrommet (11):

Prøver vil bli samlet i viralt transportmedium (VTM), supplert med RNA-stabiliseringsbuffer (Qiagen AVL-buffer) og bærer-RNA og deretter lagret ved -80C. Bærer-RNA vil fungere som både en bærer og en intern kontroll ved å inneholde genomisk RNA fra plantetobakkmosaikkviruset. Et 540 ul volum RNA-prøve vil bli renset med QIAmp Viral RNA Mini Extraction Kit og konsentrert omtrent 10 ganger. RSV-serotype A og B så vel som kontrollviruset av tobakksmosaikkvirus-RNA vil bli påvist ved revers transkripsjon og kvantitativ PCR. I tillegg kan nNasopharyngeal vattpinne også brukes til kulturer med inokulering i petriskål som inneholder RSV-spesifikke medier.

Overflatebelastningen til RSV vil bli vurdert ved plassering av åpne standard petriskåler fylt med VTM på de tre luftprøvetakingsstedene. Dekslene til petriskålene fjernes i begynnelsen av og lukkes etter luftprøvetakingen. Utvalgte miljøoverflater vil bli tatt prøver med sterile vattpinner fuktet med VTM- eller TSB-buljong. Et to kvadrattommers område vil bli vasket én gang på tre steder med høy berøring daglig: hodet på sengehåndtaket, midten av matbrettbordet og et bord/horisontal overflate på baksiden av rommet (omtrent 10 fot unna etter foten av sengen) . Pinnene vil bli vortexet i 30 sekunder, og behandlet som beskrevet for RSV-deteksjon i luftprøver.

Under prøvetakingen vil helsepersonell (HCP) og studiepersonell bruke åndedrettsvern (N-95) for å redusere risikoen for ekstern kontaminering på grunn av potensiell RSV-bærerstatus. Respiratorene vil bli samlet og en to kvadrattommers midtdel av respiratoren vil bli kuttet ut med steril saks. Utskjæringene legges i 2 ml VTM eller TSB buljong og fryses. Etter tining blir prøvene vortexet/agitert, og viderebehandlet som beskrevet for RSV-prøvene.