Emissiepatronen van respiratoir syncytieel virus

Onderzoeksopzet en methoden Het hoofddoel van deze studie is het identificeren en bepalen van luchtemissie en daaropvolgende oppervlaktebelastingspatronen van RSV bij natuurlijk geïnfecteerde patiënten.

Patiënt informatie:

Patiënten die op de Spoedeisende Hulp (ED) zijn gezien of in het ziekenhuis zijn opgenomen met luchtwegsymptomen en de diagnose RSV hebben, komen in aanmerking voor inschrijving. De resultaten van routinematige interne diagnostische laboratoriumtests zoals het Respiratory Viral Panel (RVP) zullen worden gebruikt om patiënten te identificeren.

Instelling:

Wake Forest Baptist Medical Center (WFBMC) is een academisch ziekenhuis met 885 bedden voor tertiaire zorg. Er zijn jaarlijks ongeveer 36.000 intramurale opnames en >89.000 SEH-bezoeken (pediatrisch/volwassenen). Luchtbemonstering wordt uitgevoerd in patiëntenkamers onder turbulente luchtstromen (6 totale luchtverversingen/uur) bij een temperatuur van ongeveer 20°C en een relatieve luchtvochtigheid van 40%. De lucht wordt gefilterd door ANSI/ASHRAE 52.2-conforme eindfilters met een minimale efficiëntierapportagewaarde van 15.

bemonstering:

Van elke proefpersoon wordt één nasofaryngeaal uitstrijkje afgenomen. Het monster zal worden gebruikt om RSV-infectie te bevestigen en de hoeveelheid ziekteverwekker te bepalen die door het individu wordt gedragen. Monsters zullen worden geïnoculeerd in Becton Dickinson Universal Viral Transport System (VTM, BD Diagnostics, Franklin Lakes, NJ) voor real-time reverse transcriptase PCR (rRT-PCR) analyse.

Eenmalige luchtmonsters worden verzameld met behulp van zestraps Andersen-apparaten voor luchtbemonstering en bezinkingsplaten op drie locaties: het hoofdeinde van het bed/de stoel op 60 cm afstand van het hoofd van de patiënt, het voeteneind van het bed/de stoel op 20 cm afstand van het hoofd en bij de uitgang van de patiëntenkamer (11):

Monsters worden verzameld in virale transportmedia (VTM), aangevuld met RNA-stabilisatiebuffer (Qiagen AVL-buffer) en drager-RNA en vervolgens bewaard bij -80°C. Drager-RNA zal dienen als zowel een drager als een interne controle door genomisch RNA van het tabaksmozaïekvirus te bevatten. Een volume van 540 µl RNA-monster wordt gezuiverd met de QIAmp Viral RNA Mini Extraction Kit en ongeveer 10 keer geconcentreerd. RSV-serotypes A en B, evenals het controlevirus-RNA van het tabaksmozaïekvirus, zullen worden gedetecteerd door reverse transcriptie en kwantitatieve PCR. Bovendien kan een nasofaryngeaal uitstrijkje ook worden gebruikt voor culturen met inoculatie in een petrischaal met RSV-specifieke media.

De oppervlaktebelasting van RSV zal worden beoordeeld door plaatsing van open standaard petrischalen gevuld met VTM op de drie luchtbemonsteringslocaties. De deksels van de petrischalen worden aan het begin van de luchtmonstername verwijderd en gesloten. Geselecteerde omgevingsoppervlakken worden bemonsterd met steriele wattenstaafjes die zijn bevochtigd met VTM- of TSB-bouillon. Een gebied van 2 vierkante inch wordt één keer per dag afgeveegd op drie high-touch locaties per dag: hoofdeinde van de bedleuning, midden van tafel met etenswaren en een tafel/horizontaal oppervlak aan de achterkant van de kamer (ongeveer 3 meter verder voorbij het voeteneind van het bed) . De uitstrijkjes worden gedurende 30 seconden gevortext en verwerkt zoals beschreven voor RSV-detectie in luchtmonsters.

Tijdens de bemonstering dragen zorgprofessionals (HCP) en onderzoekspersoneel ademhalingsmaskers (N-95) om het risico op externe besmetting als gevolg van mogelijke RSV-dragerschap te verminderen. De beademingsapparaten worden verzameld en een middengedeelte van 2 vierkante inch van het beademingsapparaat wordt uitgesneden met een steriele schaar. De uitsnijdingen worden in 2 ml VTM- of TSB-bouillon geplaatst en ingevroren. Na het ontdooien worden de monsters gevortext/geroerd en verder verwerkt zoals beschreven voor de RSV-monsters.