Emisní vzorce respiračního syncytiálního viru

Design a metody výzkumu Hlavním cílem této studie je identifikovat a určit vzdušnou emisi a následné vzory povrchové zátěže RSV u přirozeně infikovaných pacientů.

Informace pro pacienta:

Pacienti navštěvovaní na pohotovostním oddělení (ED) nebo přijatí do nemocnice s respiračními příznaky a diagnostikovaným RSV jsou způsobilí k zařazení. K identifikaci pacientů budou použity výsledky rutinních laboratorních diagnostických testů, jako je Respiratory Viral Panel (RVP).

Nastavení:

Wake forest baptist medical center (WFBMC) je fakultní nemocnice terciární péče s 885 lůžky. Existuje přibližně 36 000 hospitalizací a > 89 000 návštěv ED ročně (děti/dospělí). Odběry vzduchu se provádějí v pacientských pokojích za turbulentního proudění vzduchu (celkem 6 výměn vzduchu za hodinu) při teplotě přibližně 20 °C a 40% relativní vlhkosti. Vzduch je filtrován koncovými filtry vyhovujícími normě ANSI/ASHRAE 52.2 s minimální udávanou hodnotou účinnosti 15.

Vzorkování:

Od každého subjektu bude odebrán jeden výtěr z nosohltanu. Vzorek bude použit k potvrzení infekce RSV a stanovení množství patogenu neseného jedincem. Vzorky budou naočkovány do Becton Dickinson Universal Viral Transport System (VTM, BD Diagnostics, Franklin Lakes, NJ) pro analýzu PCR s reverzní transkriptázou (rRT-PCR) v reálném čase.

Jednorázové vzorky vzduchu budou odebírány pomocí šestistupňových zařízení pro odběr vzduchu Andersen a usazovacích desek na třech místech, hlava lůžka/křesla dvě stopy od hlavy pacienta, noha postele/křesla osm stop od hlavy a na výstupu. pacientského pokoje (11):

Vzorky budou odebírány do virového transportního média (VTM), doplněné RNA stabilizačním pufrem (Qiagen AVL pufr) a nosičovou RNA a poté skladovány při -80C. Nosič RNA bude sloužit jako nosič i jako vnitřní kontrola tím, že obsahuje genomovou RNA viru rostlinné tabákové mozaiky. Objem 540 ul vzorku RNA bude purifikován pomocí QIAmp Viral RNA Mini Extraction Kit a koncentrován přibližně 10krát. Sérotypy RSV A a B a také kontrolní RNA viru virové mozaiky tabáku budou detekovány pomocí reverzní transkripce a kvantitativní PCR. Kromě toho lze výtěr z nosohltanu použít také pro kultury s inokulací na Petriho misku obsahující médium specifické pro RSV.

Povrchová zátěž RSV bude posouzena umístěním otevřených standardních Petriho misek naplněných VTM na tři místa odběru vzduchu. Kryty Petriho misek budou odstraněny na začátku a uzavřeny po relaci vzorkování vzduchu. Vybrané povrchy prostředí budou odebrány sterilními tampony navlhčenými v bujónu VTM nebo TSB. Plocha o velikosti dvou čtverečních palců bude jednou denně otřena na třech místech s vysokým dotykem: hlava zábradlí postele, střed stolu na tác s jídlem a stůl/horizontální povrch v zadní části místnosti (přibližně 10 stop od postele) . Výtěry budou vortexovány po dobu 30 sekund a zpracovány tak, jak je popsáno pro detekci RSV ve vzorcích vzduchu.

Během odběru vzorků budou zdravotníci (HCP) a pracovníci studie nosit respirátory (N-95), aby se snížilo riziko vnější kontaminace kvůli potenciálnímu stavu nosiče RSV. Respirátory se shromáždí a pomocí sterilních nůžek se vystřihne střední část respirátoru o velikosti dvou čtverečních palců. Výřezy se umístí do 2 ml VTM nebo TSB bujónu a zmrazí. Po rozmrazení se vzorky vortexují/protřepou a dále zpracují, jak je popsáno pro vzorky RSV.