Padrões de Emissão do Vírus Sincicial Respiratório

Projeto e métodos de pesquisa O principal objetivo deste estudo é identificar e determinar a emissão aérea e os padrões de carga de superfície subsequentes de RSV em pacientes naturalmente infectados.

Informação do paciente:

Os pacientes atendidos no Departamento de Emergência (DE) ou internados no hospital com sintomas respiratórios e diagnosticados com VSR são elegíveis para inscrição. Os resultados dos testes de diagnóstico laboratoriais internos de rotina, como o Painel Viral Respiratório (RVP), serão usados ​​para identificar os pacientes.

Contexto:

Wake Forest Baptist Medical Center (WFBMC) é um hospital universitário de atendimento terciário com 885 leitos. Há aproximadamente 36.000 internações e >89.000 atendimentos de emergência anualmente (pediátrico/adulto). A amostragem de ar é realizada em quartos de pacientes sob fluxos de ar turbulentos (6 trocas totais de ar/hora) a aproximadamente 20°C de temperatura e 40% de umidade relativa. O ar é filtrado por filtros finais compatíveis com ANSI/ASHRAE 52.2 com um valor de relatório de eficiência mínimo de 15.

Amostragem:

Um swab nasofaríngeo será obtido de cada indivíduo. A amostra será usada para confirmar a infecção por RSV e determinar a quantidade do patógeno transportada pelo indivíduo. As amostras serão inoculadas no Sistema de Transporte Viral Universal Becton Dickinson (VTM, BD Diagnostics, Franklin Lakes, NJ) para análise em tempo real de PCR por transcriptase reversa (rRT-PCR).

Amostras de ar únicas serão coletadas usando dispositivos de amostragem de ar Andersen de seis estágios e placas de assentamento em três locais, cabeceira da cama/cadeira a meio metro de distância da cabeça do paciente, pé da cama/cadeira a oito pés de distância da cabeça e na saída do quarto do paciente (11):

As amostras serão coletadas em meios de transporte viral (VTM), suplementadas com tampão de estabilização de RNA (tampão Qiagen AVL) e RNA transportador e, em seguida, armazenadas a -80C. O RNA transportador servirá tanto como transportador quanto como controle interno, contendo o RNA genômico do vírus do mosaico da planta do tabaco. Um volume de 540 ul de amostra de RNA será purificado com o QIAmp Viral RNA Mini Extraction Kit e concentrado aproximadamente 10 vezes. Os sorotipos A e B do RSV, bem como o RNA do vírus do mosaico viral do tabaco de controle, serão detectados por transcrição reversa e PCR quantitativo. Além disso, swab nasofaríngeo também pode ser usado para culturas com inoculação em placa de Petri contendo meio específico para RSV.

A carga superficial de RSV será avaliada pela colocação de placas de Petri padrão abertas preenchidas com VTM nos três locais de amostragem de ar. As tampas das placas de Petri serão removidas no início e fechadas após a sessão de amostragem de ar. As superfícies ambientais selecionadas serão amostradas com swabs estéreis umedecidos com caldo VTM ou TSB. Uma área de duas polegadas quadradas será esfregada uma vez em três locais de alto toque diariamente: cabeceira do corrimão da cama, meio da mesa da bandeja de comida e uma mesa/superfície horizontal na parte de trás do quarto (aproximadamente 10 pés de distância do pé da cama) . Os swabs serão agitados em vórtex por 30 segundos e processados ​​conforme descrito para detecção de RSV em amostras de ar.

Durante a amostragem, o profissional de saúde (HCP) e a equipe do estudo usarão respiradores (N-95) para reduzir o risco de contaminação externa devido ao potencial status de portador de RSV. Os respiradores serão coletados e uma seção média de duas polegadas quadradas do respirador será cortada com uma tesoura estéril. Os recortes são colocados em 2 mL de caldo VTM ou TSB e congelados. Após o descongelamento, as amostras são submetidas a vórtex/agitação e posteriormente processadas conforme descrito para as amostras de RSV.