Характер эмиссии респираторно-синцитиального вируса

Дизайн и методы исследования Основная цель данного исследования состоит в том, чтобы идентифицировать и определить воздушно-капельные выбросы и последующую структуру поверхностной нагрузки RSV у пациентов, инфицированных естественным путем.

Информация о пациенте:

Пациенты, осмотренные в отделении неотложной помощи (ED) или поступившие в больницу с респираторными симптомами и с диагнозом RSV, имеют право на регистрацию. Результаты обычных лабораторных диагностических тестов, таких как панель респираторных вирусов (RVP), будут использоваться для выявления пациентов.

Параметр:

Баптистский медицинский центр Уэйк Форест (WFBMC) - это учебная больница третичного уровня на 885 коек. Ежегодно происходит около 36 000 госпитализаций и > 89 000 посещений отделений неотложной помощи (детских/взрослых). Отбор проб воздуха проводится в палатах пациентов при турбулентных потоках воздуха (6 полных воздухообменов в час) при температуре приблизительно 20°C и относительной влажности 40%. Воздух фильтруется концевыми фильтрами, соответствующими стандарту ANSI/ASHRAE 52.2, с минимальным отчетным значением эффективности 15.

Выборка:

От каждого субъекта будет получен один мазок из носоглотки. Образец будет использоваться для подтверждения инфекции RSV и определения количества возбудителя, переносимого человеком. Образцы будут инокулированы в универсальную вирусную транспортную систему Becton Dickinson (VTM, BD Diagnostics, Franklin Lakes, NJ) для анализа ПЦР с обратной транскриптазой в реальном времени (rRT-PCR).

Одноразовые пробы воздуха будут собираться с помощью шестиступенчатых устройств для отбора проб воздуха Андерсена и отстойных чашек в трех местах: изголовье кровати/кресла в двух футах от головы пациента, изножье кровати/кресла в восьми футах от головы и на выходе. палаты (11):

Образцы будут собраны в вирусной транспортной среде (VTM), дополнены буфером для стабилизации РНК (буфер Qiagen AVL) и РНК-носителем, а затем сохранены при -80°C. РНК-носитель будет служить как носителем, так и внутренним контролем, поскольку содержит геномную РНК вируса растительной табачной мозаики. Образец РНК объемом 540 мкл очищают с помощью набора QIAmp Viral RNA Mini Extraction Kit и концентрируют примерно в 10 раз. RSV серотипов A и B, а также контрольная вирусная РНК вируса табачной мозаики будут обнаружены с помощью обратной транскрипции и количественной ПЦР. Кроме того, мазок из носоглотки также можно использовать для посева культур с инокуляцией в чашку Петри, содержащую среду, специфичную для РСВ.

Поверхностное бремя RSV будет оцениваться путем размещения стандартных чашек Петри, заполненных VTM, в трех точках отбора проб воздуха. Крышки с чашек Петри будут сняты в начале и закрыты после сеанса отбора проб воздуха. С выбранных поверхностей окружающей среды будут взяты образцы стерильными тампонами, смоченными бульоном VTM или TSB. Площадь в два квадратных дюйма будет очищаться один раз в трех местах с интенсивным контактом ежедневно: изголовье поручня кровати, середина стола с подносом для еды и стол/горизонтальная поверхность в задней части комнаты (примерно в 10 футах от изножья кровати). . Тампоны встряхивают в течение 30 секунд и обрабатывают, как описано для обнаружения РСВ в пробах воздуха.

Во время отбора проб медицинский работник (HCP) и исследовательский персонал будут носить респираторы (N-95), чтобы снизить риск внешнего заражения из-за потенциального статуса носителя RSV. Респираторы будут собраны, и с помощью стерильных ножниц будет вырезана средняя часть респиратора площадью два квадратных дюйма. Срезы помещают в 2 мл бульона VTM или TSB и замораживают. После оттаивания образцы встряхивают/встряхивают и далее обрабатывают, как описано для образцов RSV.