Schemi di emissione del virus respiratorio sinciziale

Disegno e metodi della ricerca L'obiettivo principale di questo studio è identificare e determinare l'emissione nell'aria e i successivi modelli di carico superficiale di RSV in pazienti con infezione naturale.

Informazioni per il paziente:

I pazienti visitati al Pronto Soccorso (DE) o ricoverati in ospedale con sintomi respiratori e con diagnosi di RSV sono idonei per l'arruolamento. I risultati dei test diagnostici di laboratorio interni di routine come il Respiratory Viral Panel (RVP) verranno utilizzati per identificare i pazienti.

Collocamento:

Il Wake Forest Baptist Medical Center (WFBMC) è un ospedale universitario per cure terziarie da 885 posti letto. Ci sono circa 36.000 ricoveri ospedalieri e > 89.000 visite di pronto soccorso all'anno (pediatrici/adulti). Il campionamento dell'aria viene condotto nelle stanze dei pazienti con flussi d'aria turbolenti (6 cambi d'aria totali/ora) a circa 20°C di temperatura e 40% di umidità relativa. L'aria viene filtrata da filtri terminali conformi ANSI/ASHRAE 52.2 con un valore di efficienza minimo di 15.

Campionamento:

Da ciascun soggetto verrà prelevato un tampone nasofaringeo. Il campione verrà utilizzato per confermare l'infezione da RSV e determinare la quantità di patogeno trasportato dall'individuo. I campioni saranno inoculati nel sistema di trasporto virale universale Becton Dickinson (VTM, BD Diagnostics, Franklin Lakes, NJ) per l'analisi PCR della trascrittasi inversa in tempo reale (rRT-PCR).

I campioni d'aria una tantum verranno raccolti utilizzando dispositivi di campionamento dell'aria Andersen a sei stadi e piastre di sedimentazione in tre posizioni, testata del letto/sedia a due piedi dalla testa del paziente, piedi del letto/sedia a otto piedi dalla testa e all'uscita della stanza del paziente (11):

I campioni saranno raccolti in terreno di trasporto virale (VTM), integrato con tampone di stabilizzazione dell'RNA (tampone Qiagen AVL) e carrier RNA e quindi conservati a -80°C. Il carrier RNA fungerà sia da carrier che da controllo interno contenendo l'RNA genomico del virus del mosaico del tabacco vegetale. Un volume di 540 ul di campione di RNA sarà purificato con il kit QIAmp Viral RNA Mini Extraction Kit e concentrato circa 10 volte. I sierotipi A e B di RSV così come l'RNA del virus del mosaico del tabacco virale di controllo saranno rilevati mediante trascrizione inversa e PCR quantitativa. Inoltre, nIl tampone nasofaringeo può essere utilizzato anche per colture con inoculazione in piastre di Petri contenenti terreni specifici per RSV.

Il carico superficiale di RSV sarà valutato posizionando piastre di Petri standard aperte riempite con VTM nei tre siti di campionamento dell'aria. I coperchi delle piastre Petri saranno rimossi all'inizio e chiusi dopo la sessione di campionamento dell'aria. Le superfici ambientali selezionate saranno campionate con tamponi sterili inumiditi con brodo VTM o TSB. Un'area di due pollici quadrati verrà sottoposta a tampone una volta al giorno in tre punti ad alto contatto: testa del corrimano del letto, centro del tavolo del vassoio del cibo e un tavolo/superficie orizzontale sul retro della stanza (a circa 10 piedi di distanza oltre i piedi del letto) . I tamponi verranno sottoposti a vortex per 30 secondi e processati come descritto per il rilevamento di RSV nei campioni d'aria.

Durante il campionamento, gli operatori sanitari (HCP) e il personale dello studio indosseranno respiratori (N-95) per ridurre il rischio di contaminazione esterna dovuta al potenziale stato di portatore di RSV. I respiratori verranno raccolti e una sezione centrale di due pollici quadrati del respiratore verrà ritagliata utilizzando forbici sterili. I ritagli vengono posti in 2 ml di brodo VTM o TSB e congelati. Dopo lo scongelamento, i campioni vengono sottoposti a vortex/agitazione e ulteriormente elaborati come descritto per i campioni di RSV.