Emissionsmønstre af respiratorisk syncytialvirus

Forskningsdesign og -metoder Hovedformålet med denne undersøgelse er at identificere og bestemme luftbåren emission og efterfølgende overfladebelastningsmønstre af RSV hos naturligt inficerede patienter.

Patientoplysninger:

Patienter, der ses på Akutafdelingen (ED) eller indlægges på hospitalet med luftvejssymptomer og diagnosticeres med RSV, er berettiget til indskrivning. Resultaterne af rutinemæssige interne laboratoriediagnostiske tests såsom Respiratory Viral Panel (RVP) vil blive brugt til at identificere patienter.

Indstilling:

Wake forest baptist Medical Center (WFBMC) er et 885 sengs undervisningshospital for tertiær pleje. Der er cirka 36.000 døgnindlæggelser og >89.000 akutmodtagelsesbesøg årligt (pædiatrisk/voksen). Luftprøvetagning udføres i patientværelser under turbulente luftstrømme (6 samlede luftskift/time) ved ca. 20°C temperatur og 40 % relativ luftfugtighed. Luft filtreres af ANSI/ASHRAE 52.2-kompatible slutfiltre med en minimumseffektivitetsrapporteringsværdi på 15.

Prøveudtagning:

En nasopharyngeal podning vil blive opnået fra hvert forsøgsperson. Prøven vil blive brugt til at bekræfte RSV-infektion og bestemme mængden af ​​patogenet, der bæres af individet. Prøver vil blive inokuleret i Becton Dickinson Universal Viral Transport System (VTM, BD Diagnostics, Franklin Lakes, NJ) til real-time revers transcriptase PCR (rRT-PCR) analyse.

Engangsluftprøver vil blive indsamlet ved hjælp af seks-trins Andersen-luftprøveudtagningsanordninger og sæt plader på tre steder, sengehoved/stol to meter fra patientens hoved, fodenden af ​​seng/stol otte meter væk fra hovedet og ved udgangen af patientrummet (11):

Prøver vil blive indsamlet i virale transportmedier (VTM), suppleret med RNA-stabiliseringsbuffer (Qiagen AVL-buffer) og bærer-RNA og derefter opbevaret ved -80C. Bærer-RNA vil fungere som både en bærer og en intern kontrol ved at indeholde genomisk RNA fra plantetobaksmosaikviruset. En 540 ul volumen RNA-prøve renses med QIAmp Viral RNA Mini Extraction Kit og koncentreres ca. 10 gange. RSV-serotype A og B såvel som kontrolvirus-tobaksmosaikvirus-RNA vil blive påvist ved omvendt transkription og kvantitativ PCR. Derudover kan nNasopharyngeal podning også bruges til kulturer med podning i petriskål indeholdende RSV-specifikke medier.

Overfladebelastningen af ​​RSV vil blive vurderet ved at placere åbne standard petriskåle fyldt med VTM på de tre luftprøveudtagningssteder. Dækslerne på petriskålene vil blive fjernet i begyndelsen af ​​og lukket efter luftprøvetagningen. Udvalgte miljøoverflader vil blive udtaget med sterile vatpinde fugtet med VTM eller TSB bouillon. Et område på to kvadrattommer vil blive vasket én gang på tre steder med høj berøring dagligt: ​​hovedet af sengegelænderet, midten af ​​madbakkebordet og et bord/vandret overflade bagerst i rummet (ca. 10 fod væk fra foden af ​​sengen) . Podningerne vil blive vortexet i 30 sekunder og behandlet som beskrevet for RSV-detektion i luftprøver.

Under prøvetagningen vil sundhedspersonale (HCP) og undersøgelsespersonale bære åndedrætsværn (N-95) for at reducere risikoen for ekstern kontaminering på grund af potentiel RSV-bærerstatus. Åndedrætsværnene vil blive indsamlet, og en to kvadrattomme midterdel af åndedrætsværnet vil blive skåret ud ved hjælp af en steril saks. Udskæringerne anbringes i 2 ml VTM eller TSB bouillon og fryses. Efter optøning vortex/omrøres prøverne og behandles yderligere som beskrevet for RSV-prøverne.