Schémas d'émission du virus respiratoire syncytial

Conception et méthodes de recherche L'objectif principal de cette étude est d'identifier et de déterminer les émissions atmosphériques et les modèles de charge de surface subséquents du VRS chez les patients naturellement infectés.

Informations patient :

Les patients vus au service des urgences (ED) ou admis à l'hôpital avec des symptômes respiratoires et diagnostiqués avec le VRS sont éligibles pour l'inscription. Les résultats des tests de diagnostic de laboratoire internes de routine tels que le panel viral respiratoire (RVP) seront utilisés pour identifier les patients.

Paramètre:

Le centre médical baptiste de Wake Forest (WFBMC) est un hôpital d'enseignement de soins tertiaires de 885 lits. Il y a environ 36 000 hospitalisations et > 89 000 visites aux urgences par an (pédiatrie/adulte). L'échantillonnage de l'air est effectué dans les chambres des patients sous des flux d'air turbulents (6 changements d'air au total/heure) à une température d'environ 20 °C et une humidité relative de 40 %. L'air est filtré par des filtres d'extrémité conformes à la norme ANSI/ASHRAE 52.2 avec une valeur de rapport d'efficacité minimale de 15.

Échantillonnage:

Un écouvillon nasopharyngé sera prélevé sur chaque sujet. L'échantillon sera utilisé pour confirmer l'infection par le VRS et déterminer la quantité d'agent pathogène transporté par l'individu. Les échantillons seront inoculés dans le système de transport viral universel Becton Dickinson (VTM, BD Diagnostics, Franklin Lakes, NJ) pour une analyse PCR en temps réel de la transcriptase inverse (rRT-PCR).

Des échantillons d'air uniques seront prélevés à l'aide d'appareils d'échantillonnage d'air Andersen à six étapes et de plaques de décantation à trois endroits, tête de lit/chaise à deux pieds de la tête du patient, pied de lit/chaise à huit pieds de la tête et à la sortie de la chambre du patient (11) :

Les échantillons seront prélevés dans un milieu de transport viral (VTM), additionnés d'un tampon de stabilisation d'ARN (tampon Qiagen AVL) et d'ARN porteur, puis stockés à -80°C. L'ARN porteur servira à la fois de porteur et de contrôle interne en contenant l'ARN génomique du virus de la mosaïque du tabac végétal. Un volume de 540 ul d'échantillon d'ARN sera purifié avec le kit QIAmp Viral RNA Mini Extraction et concentré environ 10 fois. Les sérotypes A et B du VRS ainsi que l'ARN du virus de la mosaïque du tabac viral témoin seront détectés par transcription inverse et PCR quantitative. De plus, l'écouvillon nasopharyngé peut également être utilisé pour les cultures avec inoculation dans une boîte de Pétri contenant un milieu spécifique au RSV.

La charge de surface du VRS sera évaluée en plaçant des boîtes de Pétri standard ouvertes remplies de VTM aux trois emplacements d'échantillonnage de l'air. Les couvercles des boîtes de Petri seront retirés au début et fermés après la session de prélèvement d'air. Les surfaces environnementales sélectionnées seront échantillonnées avec des écouvillons stériles humidifiés avec du bouillon VTM ou TSB. Une zone de deux pouces carrés sera essuyée une fois par jour à trois endroits très touchés : la main courante de la tête du lit, le milieu de la table du plateau de nourriture et une table/surface horizontale à l'arrière de la pièce (environ 10 pieds après le pied du lit) . Les écouvillons seront vortexés pendant 30 secondes et traités comme décrit pour la détection du VRS dans les échantillons d'air.

Pendant l'échantillonnage, le professionnel de la santé (HCP) et le personnel de l'étude porteront des respirateurs (N-95) pour réduire le risque de contamination externe en raison du statut de porteur potentiel du VRS. Les respirateurs seront collectés et une section médiane de deux pouces carrés du respirateur sera découpée à l'aide de ciseaux stériles. Les découpes sont placées dans 2 ml de bouillon VTM ou TSB et congelées. Après décongélation, les échantillons sont vortexés/agités, puis traités comme décrit pour les échantillons de RSV.