Emissionsmuster des Respiratory Syncytial Virus

Forschungsdesign und -methoden Das Hauptziel dieser Studie ist die Identifizierung und Bestimmung der luftgetragenen Emission und der anschließenden Oberflächenbelastungsmuster von RSV bei natürlich infizierten Patienten.

Informationen zum Patienten:

Patienten, die in der Notaufnahme (ED) gesehen oder mit respiratorischen Symptomen ins Krankenhaus eingeliefert wurden und bei denen RSV diagnostiziert wurde, sind für die Aufnahme berechtigt. Die Ergebnisse routinemäßiger interner Labordiagnostiktests wie dem Respiratory Viral Panel (RVP) werden zur Identifizierung von Patienten verwendet.

Einstellung:

Das Wake Forest Baptist Medical Center (WFBMC) ist ein Lehrkrankenhaus der Tertiärversorgung mit 885 Betten. Jährlich gibt es ungefähr 36.000 stationäre Aufnahmen und >89.000 ED-Besuche (Kinder/Erwachsene). Luftproben werden in Patientenzimmern unter turbulenten Luftströmen (insgesamt 6 Luftwechsel/Stunde) bei einer Temperatur von etwa 20 °C und 40 % relativer Luftfeuchtigkeit durchgeführt. Die Luft wird durch ANSI/ASHRAE 52.2-konforme Endfilter mit einem Mindestwirkungsgrad von 15 gefiltert.

Probenahme:

Von jedem Probanden wird ein Nasen-Rachen-Abstrich entnommen. Die Probe wird verwendet, um eine RSV-Infektion zu bestätigen und die Menge des Erregers zu bestimmen, der von der Person getragen wird. Die Proben werden in das Becton Dickinson Universal Viral Transport System (VTM, BD Diagnostics, Franklin Lakes, NJ) für die Reverse-Transkriptase-PCR-Analyse (rRT-PCR) in Echtzeit eingeimpft.

Einmalige Luftproben werden mit sechsstufigen Andersen-Luftprobenentnahmegeräten und Absetzplatten an drei Stellen gesammelt: Kopfende des Bettes/Stuhls zwei Fuß vom Kopf des Patienten entfernt, Fußende des Bettes/Stuhls acht Fuß vom Kopf entfernt und am Ausgang des Patientenzimmers (11):

Die Proben werden in Virustransportmedien (VTM) gesammelt, mit RNA-Stabilisierungspuffer (Qiagen AVL-Puffer) und Träger-RNA ergänzt und dann bei -80 °C gelagert. Träger-RNA dient sowohl als Träger als auch als interne Kontrolle, indem sie genomische RNA des Pflanzentabakmosaikvirus enthält. Ein Volumen von 540 ul einer RNA-Probe wird mit dem QIAmp Viral RNA Mini Extraction Kit gereinigt und etwa 10-fach konzentriert. Die RSV-Serotypen A und B sowie die Kontroll-RNA des viralen Tabakmosaikvirus werden durch reverse Transkription und quantitative PCR nachgewiesen. Darüber hinaus können nNasopharynxabstriche auch für Kulturen mit Inokulation in Petrischalen mit RSV-spezifischen Medien verwendet werden.

Die Oberflächenbelastung durch RSV wird bewertet, indem offene Standard-Petrischalen, die mit VTM gefüllt sind, an den drei Luftprobenahmestellen platziert werden. Die Abdeckungen der Petrischalen werden zu Beginn der Probenahme entfernt und nach der Probenahme geschlossen. Ausgewählte Umgebungsoberflächen werden mit sterilen, mit VTM- oder TSB-Brühe angefeuchteten Tupfern beprobt. Ein zwei Quadratzoll großer Bereich wird einmal täglich an drei häufig berührten Stellen abgetupft: am Kopfende des Betthandlaufs, in der Mitte des Essenstabletts und auf einem Tisch/einer horizontalen Fläche im hinteren Teil des Raums (etwa 10 Fuß vom Fuß des Betts entfernt). . Die Abstriche werden 30 Sekunden lang gevortext und wie für den RSV-Nachweis in Luftproben beschrieben verarbeitet.

Während der Probenahme tragen medizinisches Fachpersonal (HCP) und Studienpersonal Atemschutzmasken (N-95), um das Risiko einer externen Kontamination aufgrund eines potenziellen RSV-Trägerstatus zu verringern. Die Beatmungsgeräte werden eingesammelt und mit einer sterilen Schere wird ein zwei Quadratzoll großer Mittelteil des Beatmungsgeräts ausgeschnitten. Die Ausschnitte werden in 2 ml VTM- oder TSB-Brühe gegeben und eingefroren. Nach dem Auftauen werden die Proben gevortext/geschüttelt und wie für die RSV-Proben beschrieben weiterverarbeitet.