Wzorce emisji syncytialnego wirusa oddechowego

Projekt i metody badań Głównym celem tego badania jest identyfikacja i określenie emisji w powietrzu i późniejszych wzorców obciążenia powierzchni RSV u naturalnie zakażonych pacjentów.

Informacja o pacjencie:

Do rekrutacji kwalifikują się pacjenci przyjmowani na SOR (SOR) lub przyjmowani do szpitala z objawami ze strony układu oddechowego, u których zdiagnozowano RSV. Wyniki rutynowych laboratoryjnych testów diagnostycznych, takich jak Respiratory Viral Panel (RVP), zostaną wykorzystane do identyfikacji pacjentów.

Ustawienie:

Wake Forest Baptist Medical Center (WFBMC) to szpital dydaktyczny z 885 łóżkami trzeciego stopnia. Rocznie jest około 36 000 przyjęć do szpitali i ponad 89 000 wizyt na SOR (dzieci/dorosłych). Pobieranie próbek powietrza odbywa się w salach pacjentów przy turbulentnych przepływach powietrza (łącznie 6 wymian powietrza na godzinę) w temperaturze około 20°C i wilgotności względnej 40%. Powietrze jest filtrowane przez filtry końcowe zgodne z normą ANSI/ASHRAE 52.2 o minimalnej wartości raportowania wydajności 15.

Próbowanie:

Od każdego pacjenta zostanie pobrany jeden wymaz z jamy nosowo-gardłowej. Próbka zostanie wykorzystana do potwierdzenia zakażenia RSV i określenia ilości patogenu przenoszonego przez daną osobę. Próbki zostaną zaszczepione w Becton Dickinson Universal Viral Transport System (VTM, BD Diagnostics, Franklin Lakes, NJ) w celu przeprowadzenia analizy PCR z odwrotną transkryptazą w czasie rzeczywistym (rRT-PCR).

Jednorazowe próbki powietrza będą pobierane za pomocą sześciostopniowych urządzeń Andersen do pobierania próbek powietrza i osadzania płytek w trzech miejscach, wezgłowie łóżka/krzesła dwie stopy od głowy pacjenta, noga łóżka/krzesła osiem stóp od głowy i przy wyjściu sali pacjenta (11):

Próbki zostaną zebrane w pożywkach do transportu wirusów (VTM), uzupełnione buforem do stabilizacji RNA (bufor Qiagen AVL) i nośnikowym RNA, a następnie przechowywane w temperaturze -80°C. Nośnik RNA będzie służył zarówno jako nośnik, jak i kontrola wewnętrzna, zawierając genomowy RNA wirusa mozaiki roślinnej tytoniu. Próbka RNA o objętości 540 ul zostanie oczyszczona za pomocą zestawu QIAmp Viral RNA Mini Extraction Kit i zatężona około 10-krotnie. Serotypy RSV A i B, jak również RNA kontrolnego wirusowego wirusa mozaiki tytoniu zostaną wykryte przez odwrotną transkrypcję i ilościowy PCR. Dodatkowo wymaz z nosowo-gardłowego można również stosować do hodowli z inokulacją na płytce Petriego zawierającej pożywkę specyficzną dla RSV.

Obciążenie powierzchni wirusem RSV zostanie ocenione przez umieszczenie szalek Petriego z otwartym standardem wypełnionych VTM w trzech miejscach pobierania próbek powietrza. Pokrywy szalek Petriego zostaną zdjęte na początku i zamknięte po sesji pobierania próbek powietrza. Z wybranych powierzchni środowiskowych zostaną pobrane sterylne waciki zwilżone bulionem VTM lub TSB. Powierzchnia o powierzchni dwóch cali kwadratowych zostanie wymazana raz dziennie w trzech często dotykanych miejscach: wezgłowie poręczy łóżka, środek stołu z tacą na żywność oraz stół/pozioma powierzchnia z tyłu pokoju (około 10 stóp od stopy łóżka) . Wymazy będą wirowane przez 30 sekund i przetwarzane w sposób opisany dla wykrywania RSV w próbkach powietrza.

Podczas pobierania próbek pracownik służby zdrowia (HCP) i personel badawczy będą nosić maski oddechowe (N-95), aby zmniejszyć ryzyko skażenia zewnętrznego z powodu potencjalnego statusu nosiciela RSV. Respiratory zostaną zebrane, a dwa cale kwadratowe środkowej części respiratora zostaną wycięte za pomocą sterylnych nożyczek. Wycinki umieszcza się w 2 ml bulionu VTM lub TSB i zamraża. Po rozmrożeniu próbki worteksuje się/wytrząsa i dalej przetwarza, jak opisano dla próbek RSV.