Emissionsmönster av respiratoriskt syncytialvirus

Forskningsdesign och metoder Huvudsyftet med denna studie är att identifiera och fastställa luftburna emissioner och efterföljande ytbelastningsmönster av RSV hos naturligt infekterade patienter.

Patientinformation:

Patienter som ses på akutmottagningen (ED) eller inlagda på sjukhus med luftvägssymtom och diagnostiserats med RSV är berättigade till inskrivning. Resultaten av rutinmässiga interna laboratoriediagnostiska tester såsom Respiratory Viral Panel (RVP) kommer att användas för att identifiera patienter.

Miljö:

Wake forest baptist Medical Center (WFBMC) är ett 885-bäddssjukhus för tertiärvård. Det finns cirka 36 000 slutenvårdsinläggningar och >89 000 akutbesök per år (pediatrisk/vuxen). Luftprovtagning utförs i patientrum under turbulenta luftflöden (6 totala luftbyten/timme) vid cirka 20°C temperatur och 40 % relativ luftfuktighet. Luften filtreras av ANSI/ASHRAE 52.2-kompatibla slutfilter med ett minsta rapporteringsvärde för effektivitet på 15.

Provtagning:

En nasofaryngeal pinne kommer att erhållas från varje försöksperson. Provet kommer att användas för att bekräfta RSV-infektion och bestämma mängden patogen som bärs av individen. Prover kommer att inokuleras i Becton Dickinson Universal Viral Transport System (VTM, BD Diagnostics, Franklin Lakes, NJ) för realtidsanalys av omvänt transkriptas PCR (rRT-PCR).

Engångsluftprover kommer att samlas in med hjälp av Andersen-luftprovtagningsanordningar i sex steg och placera plattor på tre ställen, sänghuvud/stol två fot från patientens huvud, sängfot/stol åtta fot från huvudet och vid utgången av patientrummet (11):

Prover kommer att samlas in i viralt transportmedium (VTM), kompletteras med RNA-stabiliseringsbuffert (Qiagen AVL-buffert) och bärar-RNA och sedan lagras vid -80C. Bärar-RNA kommer att fungera som både en bärare och en intern kontroll genom att innehålla genomiskt RNA från växttobaksmosaikviruset. En 540 ul volym RNA-prov kommer att renas med QIAmp Viral RNA Mini Extraction Kit och koncentreras ungefär 10 gånger. RSV-serotyper A och B såväl som kontrollvirus-RNA för tobaksmosaikvirus kommer att detekteras genom omvänd transkription och kvantitativ PCR. Dessutom kan nNasofaryngeal pinne också användas för kulturer med inokulering i petriskål som innehåller RSV-specifika medier.

Ytbelastningen av RSV kommer att bedömas genom att placera öppna standard petriskålar fyllda med VTM vid de tre luftprovtagningsplatserna. Petriskålarnas lock kommer att tas bort i början av och stängs efter luftprovtagningen. Utvalda miljöytor kommer att provtas med sterila bomullstoppar fuktade med VTM- eller TSB-buljong. Ett område på två kvadrattum kommer att svabbas en gång på tre ställen med hög beröring dagligen: huvudet på sänghandtaget, mitten av bordet för matbrickan och ett bord/horisontell yta på baksidan av rummet (cirka 10 fot bort från foten av sängen) . Svabbarna ska vortexas i 30 sekunder och bearbetas enligt beskrivningen för RSV-detektering i luftprover.

Under provtagningen kommer hälso- och sjukvårdspersonal (HCP) och studiepersonal att bära andningsskydd (N-95) för att minska risken för extern kontaminering på grund av potentiell RSV-bärarstatus. Andningsskydden kommer att samlas in och en två kvadrattums mittdel av respiratorn kommer att skäras ut med en steril sax. Utskärningarna placeras i 2 ml VTM eller TSB buljong och fryses. Efter upptining vortexas/skakas proverna och bearbetas vidare enligt beskrivningen för RSV-proverna.