L-PRF Plus ei-kirurginen periodontaalinen hoito

Materiaalit ja menetelmät Tutkimuksen suunnittelu ja potilaan valinta Satunnaistettu, kontrolloitu kliininen tutkimus, johon osallistui 13 potilasta (8 miestä ja 5 naista, keski-ikä 52,3 ± 9,4 vuotta), perustettiin. Potilaille kerrottiin tutkimuksen hyödyistä ja riskeistä ja jokainen osallistuja allekirjoitti tietoisen suostumuksen.

Ei-kirurginen parodontaalihoito Yksi parodontologi (L.C.) suoritti kaikki periodontaaliset hoidot. NSPT koostui kahdesta skaalaus- ja juurihöyläysjaksosta 48 tunnin sisällä paikallispuudutuksessa ultraääni- ja käsiinstrumenteilla. Lisäksi kohdat, jotka liittyvät PPD:hen ≥ 6 mm testiryhmälle osoitetussa kvadrantissa, kasteltiin L-PRF-eritteellä ja täytettiin L-PRF-kalvon pitkittäispaloilla. Potilaat saivat ohjeistusta pehmeästä ruokavaliosta, huolellisesta ja pehmeästä suuhuuhtelusta klooriheksidiinillä 0,12 % ja hampaiden harjaamatta 7 päivään L-PRF:n poistumisen välttämiseksi. Tämän ajanjakson jälkeen annettiin seuraavat ohjeet: modifioitu Bass-harjaustekniikka, hammaslanka ja hammasväliharjat sekä klooriheksidiini 0,12 % suuhuuhtelu 7 lisäpäivän ajan. Jokaisella vastaanotolla suoritettiin myös tiukka hygieniavalvonta kliinikon toimesta.

L-PRF-kalvon valmistus Kaksi näytettä laskimoverestä kerättiin kahteen 10 ml:n vacutainer-putkeen (punainen kuppi) ilman antikoagulanttia. Niitä sentrifugoitiin 408 g:llä 12 minuuttia käyttämällä pöytäsentrifugia (IntraSpinTM, Intralock®, Florida, USA) Temmermanin et al.18 kuvaaman protokollan mukaisesti. L-PRF-hyytymät poistettiin putkesta, erotettiin punasoluista ja asetettiin Xpression-laatikkoon (IntraSpinTM, Intralock®, Florida, USA) niiden puristamiseksi varovasti kalvoihin. Kalvot leikattiin pitkittäisiksi paloiksi ≥ 6 mm:n parodontaalitaskujen täyttämiseksi. Puristuksen aikana vapautunut eksudaatti, nimeltään L-PRF-erite, aspiroitiin käsiteltyjen taskujen huuhtelemiseksi. (Kuvio 1)

Kliiniset mittaukset Kaikki kliiniset mittaukset suoritti yksi koulutettu ja kalibroitu tutkija (N.J.), joka oli naamioitu määrättyä hoitoa varten käyttäen perustutkimusinstrumenttisarjaa ja University of North Carolina nro. 15 värikoodattua parodontaalianturia. Seuraavat kliiniset parametrit mitattiin lähtötilanteessa ja 6 viikkoa, 3 kuukautta ja 6 kuukautta hoidon jälkeen: mittaustaskun syvyys (PPD), kliinisen kiinnittymisen taso (CAL), ienresessio (GR), verenvuoto koettaessa (BOP) ja O' Leary plakkiindeksi (PI).19 Lisäksi juuren herkkyys (RS) arvioitiin käyttämällä 100 mm:n visuaalista analogista asteikkoa (VAS) (0 tarkoittaa, ettei kipua, 50 tarkoittaa keskiarvoa ja 100 tarkoittaa sietämätöntä kipua) 24 tunnin, 6 viikon, 3 kuukauden ja 6 kuukautta hoidon jälkeen. PPD:n, CAL:n, GR:n, BOP:n, PI:n ja RS:n muutos (ero lähtötason mittareiden ja 1, 3 ja 6 kuukauden kohdalla) laskettiin.

GCF-kokoelma GCF-näytteet kerättiin syvimmästä taskusta kustakin kvadrantista ennen kliinisen mittauksen kirjaamista (perustaso ja 6 viikkoa ja 3 kuukautta hoidon jälkeen) Porphyromona gingivalis (P.g), Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A.a) pitoisuuden arvioimiseksi. Prevotella intermedia (P.i) ja Fusobacterium nucleatum (F.n). Näytealue eristettiin puuvillarullilla ja syljen kontaminaatio vältettiin sopivalla imu- ja ilmasuihkulla. Sitten lisättiin endodonttinen #35 paperikärki, kunnes tunsi pientä vastusta, ja sitä pidettiin 30 sekuntia. Paperikärjet laitettiin välittömästi Eppendorf-putkeen ja säilytettiin -80 ºC:ssa tulevaa analyysiä varten.

Mikrobiologinen käsittely Näytteiden sulatuksen jälkeen lisättiin 1 ml fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (PBS) ja homogenoitiin. Sitten 400 μl kutakin näytettä sentrifugoitiin nopeudella 13200 rpm 3 minuuttia. Saatu pelletti dispergoitiin 200 µl:aan InstaGeneä. DNA uutettiin InstaGene-matriisilla (Bio-Rad Life Science Research, Hercules, CA, USA) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Viisi mikrolitraa puhdistettua DNA:ta käytettiin Porphyromonas gingivaliksen, Aggregatibacter actinomycetemcomitansin, Fusobacterium nucleatumin ja Prevotella intermedian kvantifiointiin. Kvantitatiivinen polymeraasiketjureaktio (qPCR) -määritys suoritettiin CFX96 Real-Time System -järjestelmällä (Biorad, Hercules, CA, USA) käyttäen Taqman 5'-nukleaasianalyysin PCR-menetelmää bakteeri-DNA:n havaitsemiseen ja kvantifiointiin. Taqman-reaktio sisälsi 12,5 μl Mastermixiä (Eurogentec, Seraing, Belgia), 4,5 μl steriiliä tislattua vettä, 1 μl molempia lajispesifisiä alukkeita ja koetinta (taulukko 1) ja 5 μl templaatti-DNA:ta. Kaikkien alukkeiden/koetinsarjan määritysolosuhteet koostuivat aluksi 2 minuutista 50 °C:ssa, jota seurasi 10 minuutin denaturaatiovaihe 95 °C:ssa, mitä seurasi 45 sykliä 95 °C:ssa 15 sekuntia ja 60 °C:ssa 60 sekuntia. . Kvantifiointi perustui plasmidin standardikäyrään. Bakteeripitoisuuden delta 6 viikon, 3 ja 6 kuukauden kohdalla (ero lähtötason mittausten ja 6 viikon, 3 ja 6 kuukauden välillä) laskettiin.

Satunnaistaminen, allokoinnin piilottaminen ja kalibrointi Potilaiden kvadrantit jaettiin kahteen hoitoryhmään kolikonheittomenetelmällä: (SRP + L-PRF) tai kontrolli (pelkästään SRP).

Ennen tutkimuksen aloittamista tehtiin kaksi tallennusta seuraavista parametreista: PPD, GR ja CAL viidellä potilaalla 24 tunnin välein ensimmäisen ja toisen tietueen välillä tutkijan sisäisen tarkkuuden vahvistamiseksi. Kaikki hampaat, lukuun ottamatta kolmatta poskihampaat, mitattiin parodontaalisen koettimen avulla kuudesta kohdasta (mesiobukkaalinen, mediobukaalinen, distobukkaalinen, mesiolinguaalinen/palataalinen, mediolinguaalinen/palataalinen ja distolinguaalinen/palataalinen). Kalibrointi hyväksyttiin, jos mittaukset lähtötilanteessa ja 24 tunnin kuluttua olivat 1 mm:n sisällä 95 %:n tasolla (korrelaatiokertoimet kaksoismittausten välillä; r = 0,95).

Tilastollinen analyysi Keskimääräisen 1,2 mm:n PPD-eron havaitsemiseksi standardipoikkeaman ollessa 1,0 α-tasolla 0,05 ja β-tasolla 0,10 (teho = 0,9), vaadittiin 10 potilaan otoskoko. Tuloksista huolimatta, mutta mahdollisten keskeytysten ennakoimiseksi tutkimuksen aikana, otoskokona n = 16 potilasta otettiin huomioon.

Bakteerimäärät muunnettiin logaritmillisesti. Lineaarista sekamallia sovellettiin muuttuvan potilaan kanssa satunnaistekijänä ja aika ja hoito kahtena ristikkäisenä kiinteänä tekijänä. Tupakointi ja PI pidettiin yhteismuuttujina. Kontrastit asetettiin laskemaan muutos lähtötasosta eri aikapisteille hoitojen välillä ja jokaiselle hoidolle erikseen. Samanaikaiseen hypoteesitestaukseen käytettiin Sidakin mukaista korjausta. Jäännösarvoista luotiin normaali kvantiilikuvaaja ja jäännöspistekaavio, joka osoitti, että tilastollisen mallin taustalla olevat oletukset voitiin tehdä.