L-PRF Plus ikke-kirurgisk periodontal behandling

Materialer og metoder Studiedesign og pasientutvelgelse En delt munn, randomisert kontrollert klinisk studie med 13 pasienter (8 menn og 5 kvinner, gjennomsnittsalder 52,3 ± 9,4 år) ble satt opp. Pasientene ble informert om fordelene og risikoene ved studien, og hver deltaker signerte informert samtykke.

Ikke-kirurgisk periodontal behandling En enkelt periodontist (LC) utførte alle periodontale behandlinger. NSPT besto av to økter med skalering og rotplaning (SRP) innen 48 timer under lokalbedøvelse ved bruk av ultralyd og håndinstrumentering. I tillegg ble stedene assosiert med PPD ≥ 6 mm i kvadranten tildelt testgruppen irrigert med L-PRF-eksudat og fylt med langsgående biter av L-PRF-membran. Pasientene fikk instruksjoner om mykt kosthold, en forsiktig og myk munnskylling med klorheksidin 0,12 % og ingen tannbørsting i løpet av 7 dager for å unngå fjerning av L-PRF. Etter denne perioden ble følgende instruksjoner gitt: modifisert Bass-børsteteknikk, tanntråd og interdentale børster, og klorheksidin 0,12 % munnskylling i 7 ekstra dager. Det ble også utført streng hygienekontroll av klinikeren i hver avtale.

L-PRF membranpreparat To prøver av veneblod ble samlet i 2 vacutainerrør (rød kopp) på 10 ml uten antikoagulant. De ble sentrifugert ved 408 g i 12 minutter ved bruk av en bordsentrifuge (IntraSpinTM, Intralock®, Florida, USA) i henhold til protokollen beskrevet av Temmerman et al.18 L-PRF-klumpene ble fjernet fra røret, separert fra de røde cellene og plassert i Xpression-boksen (IntraSpinTM, Intralock®, Florida, USA) for forsiktig å komprimere dem i membraner. Membranene ble kuttet i langsgående stykker for å fylle periodontale lommer ≥ 6 mm. Ekssudatet, som ble frigjort under kompresjonen, kalt L-PRF-ekssudatet, ble aspirert for å skylle de behandlede lommene. (Figur 1)

Kliniske målinger Alle kliniske målinger ble utført av en enkelt utdannet og kalibrert undersøker (N.J.) som ble maskert for den tildelte behandlingen, ved bruk av et grunnleggende undersøkelsesinstrumentsett og et University of North Carolina nr. 15 fargekodet periodontal sonde. Følgende kliniske parametere ble målt ved baseline og 6 uker, 3 måneder og 6 måneder etter behandling: sonderingslommedybde (PPD), klinisk tilknytningsnivå (CAL), gingival resesjon (GR), blødning ved sondering (BOP) og O´ Leary plakkindeks (PI).19 I tillegg ble rotsensitiviteten (RS) evaluert ved å bruke en 100 mm visuell analog skala (VAS) (0 indikerer ingen smerte, 50 indikerer gjennomsnittlig og 100 indikerer en uutholdelig smerte) etter 24 timer, 6 uker, 3 måneder og 6 måneder etter behandling. Endringen i PPD, CAL, GR, BOP, PI og RS (forskjell mellom baselinemål og ved 1, 3 og 6 måneder) ble beregnet.

GCF-samling GCF-prøver ble samlet inn fra den dypeste lommen fra hver kvadrant før registrering av den kliniske målingen (grunnlinje og 6 uker og 3 måneder etter behandling) for å evaluere konsentrasjonen av Porphyromona gingivalis (P.g), Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A.a), Prevotella intermedia (P.i) og Fusobacterium nucleatum (F.n). Prøveområdet ble isolert med bomullsruller, og forurensning med spytt ble unngått ved bruk av passende suge- og luftspray. Deretter ble en endodontisk papirpunkt #35 satt inn til en liten motstand ble kjent og den ble holdt i 30 sekunder. Papirpunktene ble umiddelbart satt inn i et Eppendorf-rør og lagret ved -80ºC for fremtidig analyse.

Mikrobiologisk prosessering Etter avriming av prøvene ble 1 ml fosfatbufret saltvann (PBS) tilsatt og homogenisert. Deretter ble 400 μl av hver prøve sentrifugert ved 13200 rpm i 3 minutter. Den oppnådde pelleten ble dispergert i 200 μl InstaGene. DNA ble ekstrahert med InstaGene-matrise (Bio-Rad Life Science Research, Hercules, CA, USA) i henhold til instruksjonene fra produsenten. Fem mikroliter av renset DNA ble brukt for kvantifisering av Porphyromonas gingivalis, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Fusobacterium nucleatum og Prevotella intermedia. En kvantitativ polymerasekjedereaksjon (qPCR)-analyse ble utført med et CFX96 sanntidssystem (Biorad, Hercules, CA, USA) ved bruk av Taqman 5' nukleaseanalyse-PCR-metoden for påvisning og kvantifisering av bakteriell DNA. Taqman-reaksjonen inneholdt 12,5 μl Mastermix (Eurogentec, Seraing, Belgia), 4,5 μl sterilt destillert vann, 1 μl av både artsspesifikke primere og probe (tabell 1) og 5 μl mal-DNA. Analysebetingelsene for alle primer-/probesett besto av innledende 2 minutter ved 50 °C, etterfulgt av et denatureringstrinn i 10 minutter ved 95 °C, etterfulgt av 45 sykluser med 95 °C i 15 sekunder og 60 °C i 60 sekunder . Kvantifisering var basert på en plasmidstandardkurve. Deltaet for bakteriekonsentrasjon ved 6 uker, 3 og 6 måneder (forskjell mellom baselinemål og ved 6 uker, 3 og 6 måneder) ble beregnet.

Randomisering, tildelingsskjul og kalibrering En myntkastmetode ble brukt for å tildele pasientenes kvadranter i to behandlingsgrupper: (SRP + L-PRF) eller kontroll (SRP alene).

Før studien startet ble det gjort to registreringer av følgende parametere: PPD, GR og CAL hos fem pasienter, med et 24-timers intervall mellom første og andre registrering for å validere intra-undersøkerens nøyaktighet. Alle tenner, unntatt tredje molarer, ble målt ved periodontal sondering på 6 steder (mesiobukkal, mediobukkal, distobukkal, mesiolingual/palatal, mediolingual/palatal og disstolingual/palatal). Kalibrering ble akseptert hvis målingene ved baseline og etter 24 timer var innenfor 1 mm på 95 %-nivå (korrelasjonskoeffisienter mellom dupliserte målinger; r = 0,95).

Statistisk analyse For å oppdage en gjennomsnittlig forskjell i PPD på 1,2 mm med et standardavvik på 1,0 ved et α-nivå på 0,05 og et β-nivå på 0,10 (kraft = 0,9), var det nødvendig med en prøvestørrelse på 10 pasienter. Til tross for resultatene, men for å forutse potensielle frafall under studien, ble en prøvestørrelse på n = 16 pasienter vurdert.

Bakterietellinger ble log-transformert. En lineær blandet modell ble brukt med den variable pasienten, som en tilfeldig faktor og tid og behandling som to kryssede faste faktorer. Røyking og PI ble ansett som kovariabler. Kontraster ble satt opp for å beregne endringen fra baseline for de forskjellige tidspunktene mellom behandlingene og for hver behandling fra hverandre. En korreksjon for simultan hypotesetesting i henhold til Sidak ble brukt. Det ble laget et normalt kvantilplot og restpunktplott av restverdiene som viser at forutsetningene som ligger til grunn for den statistiske modellen kunne gjøres.