L-PRF Plus Tratamiento Periodontal No Quirúrgico

Materiales y métodos Diseño del estudio y selección de pacientes Se preparó un ensayo clínico controlado aleatorio de boca dividida que inscribió a 13 pacientes (8 hombres y 5 mujeres, con una edad media de 52,3 ± 9,4 años). Los pacientes fueron informados sobre los beneficios y riesgos del estudio y cada participante firmó el consentimiento informado.

Tratamiento periodontal no quirúrgico Un solo periodoncista (L.C.) realizó todos los tratamientos periodontales. La NSPT consistió en dos sesiones de raspado y alisado radicular (SRP) dentro de las 48 horas bajo anestesia local utilizando instrumentos ultrasónicos y manuales. Además, los sitios asociados con PPD ≥ 6 mm en el cuadrante asignado al grupo de prueba se irrigaron con exudado de L-PRF y se rellenaron con piezas longitudinales de membrana L-PRF. Los pacientes recibieron instrucciones sobre dieta blanda, enjuague bucal cuidadoso y suave con clorhexidina al 0,12% y no cepillado dental durante 7 días para evitar la eliminación de L-PRF. Después de este período, se dieron las siguientes instrucciones: técnica de cepillado de Bass modificada, hilo dental, cepillos interdentales y enjuague bucal con clorhexidina al 0,12% durante 7 días adicionales. En cada cita también se realizó un estricto control de higiene por parte del clínico.

Preparación de la membrana L-PRF Se recogieron dos muestras de sangre venosa en 2 tubos vacutainer (copa roja) de 10 ml sin anticoagulante. Se centrifugaron a 408 g durante 12 minutos en una centrífuga de mesa (IntraSpinTM, Intralock®, Florida, EE. UU.) según el protocolo descrito por Temmerman et al.18 Los coágulos de L-PRF se retiraron del tubo, se separaron de los glóbulos rojos y se colocaron en la caja Xpression (IntraSpinTM, Intralock®, Florida, EE. UU.) para comprimirlos suavemente en membranas. Las membranas se cortaron en trozos longitudinales para llenar las bolsas periodontales ≥ 6 mm. El exudado, liberado durante la compresión, llamado exudado L-PRF, se aspiró para enjuagar las bolsas tratadas. (Figura 1)

Mediciones clínicas Todas las mediciones clínicas fueron realizadas por un solo examinador capacitado y calibrado (N.J.) que estaba enmascarado para el tratamiento asignado, utilizando un kit de instrumentos de examen básico y una Universidad de Carolina del Norte no. Sonda periodontal codificada por 15 colores. Los siguientes parámetros clínicos se midieron al inicio y 6 semanas, 3 meses y 6 meses después del tratamiento: profundidad de la bolsa al sondaje (PPD), nivel de inserción clínica (CAL), recesión gingival (GR), sangrado al sondaje (BOP) y O´ Índice de placa de Leary (IP).19 Además, se evaluó la sensibilidad radicular (RS) mediante una escala analógica visual (EVA) de 100 mm (0 sin dolor, 50 promedio y 100 dolor insoportable) a las 24 h, 6 semanas, 3 meses y 6 meses después del tratamiento. Se calculó el cambio en PPD, CAL, GR, BOP, PI y RS (diferencia entre las medidas iniciales y al mes, 3 y 6).

Recolección de GCF Las muestras de GCF se recolectaron del bolsillo más profundo de cada cuadrante antes de registrar la medición clínica (línea de base y 6 semanas y 3 meses después del tratamiento) para evaluar la concentración de Porphyromona gingivalis (P.g), Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A.a), Prevotella intermedia (P.i) y Fusobacterium nucleatum (F.n). El área de la muestra se aisló con rollos de algodón y se evitó la contaminación con saliva utilizando una succión adecuada y un rociador de aire. Luego, se insertó una punta de papel endodóntica #35 hasta sentir una ligera resistencia y se mantuvo durante 30 segundos. Las puntas de papel se insertaron inmediatamente en un tubo Eppendorf y se almacenaron a -80ºC para futuros análisis.

Procesamiento microbiológico Después de descongelar las muestras, se añadió 1 ml de solución salina tamponada con fosfato (PBS) y se homogeneizó. Luego, se centrifugaron 400 μl de cada muestra a 13200 rpm durante 3 minutos. El sedimento obtenido se dispersó en 200 μl de InstaGene. El ADN se extrajo con matriz InstaGene (Bio-Rad Life Science Research, Hercules, CA, EE. UU.) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se utilizaron cinco microlitros del ADN purificado para la cuantificación de Porphyromonas gingivalis, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Fusobacterium nucleatum y Prevotella intermedia. Se realizó un ensayo de reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) con un CFX96 Real-Time System (Biorad, Hercules, CA, EE. UU.) utilizando el método de PCR de ensayo de nucleasa 5' Taqman para la detección y cuantificación de ADN bacteriano. La reacción de Taqman contenía 12,5 μl de Mastermix (Eurogentec, Seraing, Bélgica), 4,5 μl de agua destilada estéril, 1 μl de cebadores y sonda específicos de especie (Tabla 1) y 5 μl de ADN molde. Las condiciones de ensayo para todos los conjuntos de cebador/sonda consistieron en un período inicial de 2 min a 50 °C, seguido de un paso de desnaturalización de 10 min a 95 °C, seguido de 45 ciclos de 95 °C durante 15 s y 60 °C durante 60 s . La cuantificación se basó en una curva estándar de plásmido. Se calculó el delta para la concentración bacteriana a las 6 semanas, 3 y 6 meses (diferencia entre las medidas iniciales ya las 6 semanas, 3 y 6 meses).

Aleatorización, ocultación de la asignación y calibración Se utilizó un método de lanzamiento de moneda para asignar los cuadrantes de los pacientes en dos grupos de tratamiento: (SRP + L-PRF) o control (SRP solo).

Antes de iniciar el estudio, se realizaron dos registros de los siguientes parámetros: PPD, GR y CAL en cinco pacientes, con un intervalo de 24 horas entre el primer y el segundo registro para validar la precisión intraexaminador. Todos los dientes, excepto los terceros molares, se midieron mediante sondaje periodontal en 6 sitios (mesiovestibular, mediovestibular, distovestibular, mesiolingual/palatino, mediolingual/palatino y distolingual/palatino). Se aceptó la calibración si las mediciones al inicio y después de 24 horas estaban dentro de 1 mm al nivel del 95 % (coeficientes de correlación entre mediciones duplicadas; r = 0,95).

Análisis estadístico Para detectar una diferencia media en PPD de 1,2 mm con una desviación estándar de 1,0 a un nivel α de 0,05 y un nivel β de 0,10 (poder = 0,9), se requirió un tamaño de muestra de 10 pacientes. A pesar de los resultados pero para anticipar posibles abandonos durante el estudio, se consideró un tamaño de muestra de n = 16 pacientes.

Los recuentos bacterianos se transformaron logarítmicamente. Se aplicó un modelo mixto lineal con la variable paciente, como factor aleatorio y tiempo y tratamiento como dos factores fijos cruzados. El tabaquismo y la IP se consideraron como covariables. Se establecieron contrastes para calcular el cambio desde el inicio para los diferentes puntos de tiempo entre los tratamientos y para cada tratamiento por separado. Se aplicó una corrección por contraste simultáneo de hipótesis según Sidak. Se crearon una gráfica de cuantiles normales y una gráfica de puntos residuales de los valores residuales que mostraban que se podían hacer las suposiciones subyacentes al modelo estadístico.