L-PRF Plus nem sebészeti periodontális kezelés

Anyagok és módszerek A vizsgálat felépítése és a betegek kiválasztása Egy osztott szájú, randomizált, kontrollos klinikai vizsgálatba 13 beteget vontak be (8 férfi és 5 nő, átlagéletkor 52,3 ± 9,4 év). A betegeket tájékoztatták a vizsgálat előnyeiről és kockázatairól, és minden résztvevő aláírta a beleegyezésüket.

Nem sebészi fogágykezelés Minden parodontális kezelést egyetlen parodontológus (L.C.) végzett. Az NSPT két skálázásból és gyökérgyalulásból (SRP) állt 48 órán belül helyi érzéstelenítésben, ultrahangos és kézi műszerekkel. Ezenkívül a tesztcsoporthoz rendelt negyedben a PPD ≥ 6 mm-es helyeit L-PRF váladékkal öntöztük, és L-PRF membrán hosszanti darabjaival töltöttük fel. A betegek utasításokat kaptak a lágy diétáról, a gondos és lágy szájöblítésről 0,12%-os klórhexidinnel, valamint a fogmosás mellőzésével 7 napig, hogy elkerüljék az L-PRF eltávolítását. Ezen időszak után a következő utasításokat adták: módosított Bass fogmosási technika, fogselyem és fogközkefék, valamint klórhexidin 0,12%-os szájöblítés további 7 napig. A klinikus által végzett szigorú higiéniai ellenőrzést is elvégezték minden találkozón.

L-PRF membrán előkészítés Két vénás vérmintát vettünk 2 db 10 ml-es vacutainer csőben (piros csésze) antikoaguláns nélkül. Ezeket 408 g-vel 12 percig centrifugáltuk asztali centrifugával (IntraSpinTM, Intralock®, Florida, USA) a Temmerman és munkatársai által leírt protokoll szerint18. Az L-PRF rögöket eltávolítottuk a csőből, elválasztottuk a vörösvértestektől, és az Xpression dobozba (IntraSpinTM, Intralock®, Florida, USA) helyeztük, hogy finoman összenyomjuk őket membránokba. A membránokat hosszanti darabokra vágtuk, hogy kitöltsék a ≥ 6 mm-es periodontális zsebeket. A kompresszió során felszabaduló váladékot, az úgynevezett L-PRF váladékot leszívtuk a kezelt zsebek öblítésére. (1.ábra)

Klinikai mérések Valamennyi klinikai mérést egyetlen képzett és kalibrált vizsgáló (N.J.) hajtott végre, akit a kijelölt kezelésre maszkban viseltek, egy alapvizsgáló műszerkészlet és az Észak-Karolinai Egyetem 1. sz. 15 színkódolt parodontális szonda. A következő klinikai paramétereket mérték a kiinduláskor és 6 héttel, 3 hónappal és 6 hónappal a kezelés után: szondázási zsebmélység (PPD), klinikai tapadási szint (CAL), ínyrecesszió (GR), vérzés szondázáskor (BOP) és O' Leary plakk index (PI).19 Ezenkívül a gyökérérzékenységet (RS) egy 100 mm-es vizuális analóg skála (VAS) segítségével értékelték (0 a fájdalom hiányát, 50 az átlagot és 100 az elviselhetetlen fájdalmat) 24 óra, 6 hét, 3 hónap és 6 hónappal a kezelés után. Kiszámították a PPD, CAL, GR, BOP, PI és RS változását (különbség a kiindulási mérőszámok és az 1., 3. és 6. hónapban mért értékek között).

GCF-gyűjtés A GCF-mintákat minden kvadráns legmélyebb zsebéből gyűjtöttük a klinikai mérés rögzítése előtt (a kiindulási érték, valamint a kezelés után 6 héttel és 3 hónappal), hogy értékeljük a Porphyromona gingivalis (P.g), az Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A.a) koncentrációját. Prevotella intermedia (P.i) és Fusobacterium nucleatum (F.n). A mintaterületet pamuttekercsekkel izoláltuk, és a nyállal történő szennyeződést megfelelő szívó- és levegőspray-vel elkerültük. Ezután egy 35-ös endodonciai papírhegyet helyeztünk be, amíg enyhe ellenállást nem éreztünk, és 30 másodpercig tartottuk. A papírhegyeket azonnal behelyeztük egy Eppendorf-csőbe, és -80 °C-on tároltuk későbbi elemzés céljából.

Mikrobiológiai feldolgozás A minták leolvasztása után 1 ml foszfáttal pufferolt sóoldatot (PBS) adtunk hozzá és homogenizáltuk. Ezután mindegyik mintából 400 μl-t centrifugáltunk 13200 fordulat/perc sebességgel 3 percig. A kapott pelletet 200 μl InstaGene-ben diszpergáltuk. A DNS-t InstaGene mátrixszal (Bio-Rad Life Science Research, Hercules, CA, USA) extraháltuk a gyártó utasításai szerint. A tisztított DNS-ből 5 mikrolitert használtunk fel a Porphyromonas gingivalis, az Aggregatibacter actinomycetemcomitans, a Fusobacterium nucleatum és a Prevotella intermedia mennyiségi meghatározására. Kvantitatív polimeráz láncreakció (qPCR) vizsgálatot végeztünk egy CFX96 Real-Time System (Biorad, Hercules, CA, USA) segítségével a Taqman 5' nukleáz assay PCR módszerrel bakteriális DNS kimutatására és mennyiségi meghatározására. A Taqman reakció 12,5 μl Mastermixet (Eurogentec, Seraing, Belgium), 4,5 μl steril desztillált vizet, 1 μl mindkét fajspecifikus primert és próbát (1. táblázat) és 5 μl templát DNS-t tartalmazott. Az összes primer/próbakészlet vizsgálati körülményei a következőkből álltak: kezdetben 2 perc 50 °C-on, majd egy 10 perces denaturációs lépés 95 °C-on, majd 45 ciklus 95 °C-on 15 másodpercig és 60 °C-on 60 másodpercig. . A mennyiségi meghatározás plazmid standard görbén alapult. Kiszámoltuk a baktériumkoncentráció deltáját a 6. héten, 3. és 6. hónapban (különbség a kiindulási mérések és a 6. hét, 3. és 6. hónap között).

Randomizálás, allokáció elrejtése és kalibrálása A betegek kvadránsainak két kezelési csoportba (SRP + L-PRF) vagy kontroll (SRP önmagában) történő besorolására pénzfeldobó módszert alkalmaztunk.

A vizsgálat megkezdése előtt a következő paraméterekről két felvétel készült: PPD, GR és CAL öt betegnél, 24 órás időközzel az első és a második rekord között, hogy ellenőrizni lehessen az intravizsgáló pontosságát. Az összes fogat, a harmadik őrlőfogak kivételével, parodontális szondával mértük 6 helyen (mesiobukkális, mediobukkális, disztobukkális, mesiolingvális/palatális, mediolinguális/palatális és disztolinguális/palatális). A kalibrálást akkor fogadtuk el, ha a kiindulási és 24 óra elteltével végzett mérések 1 mm-en belül voltak 95%-os szinten (korrelációs együtthatók a párhuzamos mérések között; r = 0,95).

Statisztikai elemzés A PPD 1,2 mm-es átlagos eltérésének kimutatásához 1,0 szórással 0,05 α szint és 0,10 β szint mellett (teljesítmény = 0,9) 10 betegből álló mintára volt szükség. Az eredmények ellenére, de a vizsgálat során bekövetkező esetleges lemorzsolódás előrejelzése érdekében n = 16 betegből álló mintát vettek figyelembe.

A baktériumszámot log-transzformáltuk. Lineáris vegyes modellt alkalmaztunk a változó beteggel, mint véletlenszerű tényezővel és az idővel és a kezeléssel, mint két keresztezett fix tényezővel. A dohányzást és a PI-t kovariánsnak tekintettük. A kontrasztokat úgy állítottuk be, hogy kiszámítsuk az alapvonalhoz viszonyított változást a kezelések közötti különböző időpontokban és az egyes kezelésektől eltekintve. A szimultán hipotézisvizsgálat Sidak szerinti korrekcióját alkalmaztuk. A reziduális értékek normál kvantilis diagramját és maradék pontdiagramját készítettem, amelyek azt mutatják, hogy a statisztikai modell alapjául szolgáló feltételezéseket meg lehet tenni.