L-PRF 플러스 비수술 치주 치료

재료 및 방법 연구 설계 및 환자 선택 13명의 환자(남성 8명과 여성 5명, 평균 연령 52.3 ± 9.4세)를 대상으로 하는 구강 분할 무작위 통제 임상 시험을 설정했습니다. 환자들은 연구의 이점과 위험에 대해 정보를 받았고 각 참가자는 정보에 입각한 동의서에 서명했습니다.

비수술적 치주 치료 단일 치주 전문의(L.C.)가 모든 치주 치료를 수행했습니다. NSPT는 초음파 및 손 기구를 사용하여 국소 마취 하에 48시간 이내에 스케일링 및 루트 플래닝(SRP)의 두 세션으로 구성되었습니다. 또한, 테스트 그룹에 할당된 사분면에서 PPD ≥ 6mm와 관련된 부위를 L-PRF 삼출물로 세척하고 L-PRF 멤브레인의 세로 조각으로 채웠습니다. 환자들은 L-PRF 제거를 피하기 위해 부드러운 식사, 클로르헥시딘 0.12%로 조심스럽고 부드러운 양치질, 7일 동안 양치질 금지에 대한 지시를 받았습니다. 이 기간이 지나면 수정된 Bass 칫솔질 기술, 치실 및 치간 칫솔, 클로르헥시딘 0.12% 구강 세정제를 추가로 7일 동안 지시했습니다. 임상의에 의한 엄격한 위생 관리도 각 약속에서 수행되었습니다.

L-PRF 막 준비 항응고제 없이 10ml의 2개의 진공관(빨간색 컵)에 정맥혈의 2개 샘플을 수집했습니다. Temmerman et al.18이 설명한 프로토콜에 따라 테이블 원심분리기(IntraSpinTM, Intralock®, Florida, USA)를 사용하여 408g에서 12분 동안 원심분리했습니다. L-PRF 응고물을 튜브에서 제거하고 적혈구에서 분리한 다음 Xpression 상자(IntraSpinTM, Intralock®, Florida, USA)에 넣어 멤브레인에 부드럽게 압축했습니다. 멤브레인을 세로 조각으로 잘라서 치주낭을 ≥ 6mm로 채웠습니다. 압축 중에 방출된 L-PRF 삼출물이라고 하는 삼출물을 흡인하여 처리된 주머니를 헹구었습니다. (그림 1)

임상 측정 모든 임상 측정은 기본 검사 장비 키트와 노스캐롤라이나 대학 No. 15가지 색상으로 구분된 치주 탐침. 베이스라인과 치료 후 6주, 3개월, 6개월에 다음 임상 매개변수를 측정했습니다: 프로빙 포켓 깊이(PPD), 임상 부착 수준(CAL), 치은 후퇴(GR), 프로빙 시 출혈(BOP) 및 O' 리어리 플라크 지수(PI).19 또한 24시간, 6주, 3개월, 치료 6개월 후. PPD, CAL, GR, BOP, PI 및 RS(기준 측정치와 1, 3, 6개월 간의 차이)의 변화를 계산했습니다.

GCF 수집 Porphyromona gingivalis(P.g), Aggregatibacter actinomycetemcomitans(A.a), Prevotella intermedia(P.i) 및 Fusobacterium nucleatum(F.n). 샘플 영역은 면봉으로 격리되었고 적절한 흡입 및 에어 스프레이를 사용하여 타액 오염을 방지했습니다. 그런 다음 약간의 저항이 느껴질 때까지 endodontic #35 paper-point를 삽입하고 30초 동안 유지합니다. 페이퍼 포인트를 Eppendorf 튜브에 즉시 삽입하고 향후 분석을 위해 -80ºC에 보관했습니다.

미생물 처리 시료를 해동한 후 PBS(phosphate-buffered saline) 1ml를 첨가하여 균질화하였다. 그런 다음 각 샘플 400μl를 13200rpm에서 3분 동안 원심분리했습니다. 얻어진 펠릿을 200㎕ InstaGene에 분산시켰다. 제조업체의 지침에 따라 InstaGene 매트릭스(Bio-Rad Life Science Research, Hercules, CA, USA)로 DNA를 추출했습니다. 5마이크로리터의 정제된 DNA를 Porphyromonas gingivalis, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Fusobacterium nucleatum 및 Prevotella intermedia의 정량화에 사용했습니다. 박테리아 DNA의 검출 및 정량화를 위한 Taqman 5' 뉴클레아제 분석 PCR 방법을 사용하여 CFX96 실시간 시스템(Biorad, Hercules, CA, USA)으로 정량적 중합효소 연쇄 반응(qPCR) 분석을 수행하였다. Taqman 반응에는 12.5μl Mastermix(Eurogentec, Seraing, Belgium), 4.5μl 멸균 증류수, 1μl의 종별 프라이머 및 프로브(표 1) 및 5μl 템플릿 DNA가 포함되어 있습니다. 모든 프라이머/프로브 세트에 대한 분석 조건은 50°C에서 초기 2분, 이후 95°C에서 10분 동안 변성 단계, 이어서 95°C에서 15초 및 60°C에서 60초의 45주기로 ​​구성되었습니다. . 정량화는 플라스미드 표준 곡선을 기반으로 했습니다. 6주, 3개월 및 6개월(기준선 측정치와 6주, 3개월 및 6개월 간의 차이)에서 박테리아 농도에 대한 델타를 계산했습니다.

무작위화, 할당 은닉 및 보정 동전 던지기 방법을 사용하여 환자의 사분면을 두 치료 그룹(SRP + L-PRF) 또는 대조군(SRP 단독)으로 할당했습니다.

연구를 시작하기 전에 5명의 환자에서 PPD, GR 및 CAL 매개변수의 두 가지 기록을 수행했으며, 검사자 내 정확도를 확인하기 위해 첫 번째 기록과 두 번째 기록 사이에 24시간 간격을 두었습니다. 제3대구치를 제외한 모든 치아는 6개 부위(mesiobuccal, mediobuccal, distobuccal, mesiolingual/palatal, mediolingual/palatal, distolingual/palatal)에서 치주 탐침으로 측정되었다. 기준선과 24시간 후 측정값이 95% 수준에서 1mm 이내이면 보정이 허용되었습니다(중복 측정 간의 상관 계수, r = 0.95).

통계 분석 α 수준 0.05 및 β 수준 0.10(검정력 = 0.9)에서 표준 편차 1.0으로 PPD의 평균 차이 1.2mm를 감지하려면 10명의 환자 표본 크기가 필요했습니다. 결과에도 불구하고 연구 중 탈락 가능성을 예상하기 위해 n = 16 환자의 샘플 크기가 고려되었습니다.

박테리아 수는 로그 변환되었습니다. 선형 혼합 모델은 변수 환자를 무작위 요인으로, 시간과 치료를 두 개의 교차 고정 요인으로 적용했습니다. 흡연과 PI는 공변량으로 간주되었습니다. 치료 사이의 다른 시점과 각 치료에 대해 기준선으로부터의 변화를 계산하기 위해 대조를 설정했습니다. Sidak에 따른 동시 가설 검정에 대한 보정이 적용되었습니다. 잔차 값의 정규 분위수 플롯 및 잔차 도트 플롯이 생성되어 통계 모델의 기본이 되는 가정이 만들어질 수 있음을 보여줍니다.