L-PRF Plus icke-kirurgisk parodontitbehandling

Material och metoder Studiedesign och patienturval En delad mun, randomiserad kontrollerad klinisk prövning med 13 patienter (8 män och 5 kvinnor, medelålder 52,3 ± 9,4 år) sattes upp. Patienterna informerades om fördelarna och riskerna med studien och varje deltagare undertecknade informerat samtycke.

Icke-kirurgisk parodontitbehandling En enda parodontolog (LC) utförde alla parodontala behandlingar. NSPT bestod av två sessioner med skalning och rotplaning (SRP) inom 48 timmar under lokalbedövning med hjälp av ultraljud och handinstrumentering. Dessutom spolades ställena associerade med PPD ≥ 6 mm i kvadranten som tilldelats testgruppen med L-PRF-exsudat och fylldes med längsgående bitar av L-PRF-membran. Patienterna fick instruktioner om mjuk kost, en noggrann och mjuk munsköljning med klorhexidin 0,12% och ingen tandborstning under 7 dagar för att undvika L-PRF-borttagning. Efter denna period gavs följande instruktioner: modifierad basborstteknik, tandtråd och interdentalborstar och klorhexidin 0,12 % munsköljning i ytterligare 7 dagar. Strikt hygienkontroll av klinikern utfördes också vid varje möte.

L-PRF-membranberedning Två prover av venöst blod samlades i 2 vacutainerrör (röd bägare) på 10 ml utan antikoagulant. De centrifugerades vid 408 g under 12 minuter med användning av en bordscentrifug (IntraSpinTM, Intralock®, Florida, USA) enligt protokollet som beskrivs av Temmerman et al.18 L-PRF-klumparna avlägsnades från röret, separerades från de röda blodkropparna och placerades i Xpression-boxen (IntraSpinTM, Intralock®, Florida, USA) för att försiktigt komprimera dem i membran. Membranen skars i längsgående bitar för att fylla parodontala fickor ≥ 6 mm. Exsudatet, som frigjordes under kompressionen, kallat L-PRF-exsudat, aspirerades för att skölja de behandlade fickorna. (Figur 1)

Kliniska mätningar Alla kliniska mätningar utfördes av en enda utbildad och kalibrerad granskare (N.J.) som var maskerad för den tilldelade behandlingen, med hjälp av ett grundläggande undersökningsinstrument och ett University of North Carolina nr. 15 färgkodade parodontala sond. Följande kliniska parametrar mättes vid baslinjen och 6 veckor, 3 månader och 6 månader efter behandling: sonderingsfickadjup (PPD), klinisk anknytningsnivå (CAL), gingival recession (GR), blödning vid sondering (BOP) och O´ Leary plack index (PI).19 Dessutom utvärderades rotkänsligheten (RS) med en 100 mm visuell analog skala (VAS) (0 indikerar ingen smärta, 50 indikerar medelvärde och 100 indikerar en outhärdlig smärta) vid 24 timmar, 6 veckor, 3 månader och 6 månader efter behandlingen. Förändringen i PPD, CAL, GR, BOP, PI och RS (skillnaden mellan baslinjemått och vid 1, 3 och 6 månader) beräknades.

GCF-insamling GCF-prover samlades in från den djupaste fickan från varje kvadrant innan den kliniska mätningen registrerades (baslinje och 6 veckor och 3 månader efter behandling) för att utvärdera koncentrationen av Porphyromona gingivalis (P.g), Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A.a), Prevotella intermedia (P.i) och Fusobacterium nucleatum (F.n). Provområdet isolerades med bomullsrullar, och kontaminering med saliv undveks med en lämplig sug- och luftspray. Sedan sattes en endodontisk pappersspets #35 in tills ett lätt motstånd kändes och den hölls i 30 sekunder. Papperspunkterna sattes omedelbart in i ett Eppendorf-rör och lagrades vid -80ºC för framtida analys.

Mikrobiologisk bearbetning Efter avfrostning av proverna tillsattes 1 ml fosfatbuffrad saltlösning (PBS) och homogeniserades. Sedan centrifugerades 400 μl av varje prov vid 13200 rpm i 3 minuter. Den erhållna pelleten dispergerades i 200 μl InstaGene. DNA extraherades med InstaGene-matris (Bio-Rad Life Science Research, Hercules, CA, USA) enligt tillverkarens instruktioner. Fem mikroliter av det renade DNA:t användes för kvantifiering av Porphyromonas gingivalis, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Fusobacterium nucleatum och Prevotella intermedia. En kvantitativ polymeraskedjereaktion (qPCR)-analys utfördes med ett CFX96 Real-Time System (Biorad, Hercules, CA, USA) med användning av Taqman 5' nukleasanalys PCR-metoden för detektion och kvantifiering av bakteriellt DNA. Taqman-reaktionen innehöll 12,5 μl Mastermix (Eurogentec, Seraing, Belgien), 4,5 μl sterilt destillerat vatten, 1 μl av både artspecifika primrar och sond (Tabell 1) och 5 μl mall-DNA. Analysbetingelser för alla primer-/probuppsättningar bestod av första 2 minuter vid 50°C, följt av ett denatureringssteg under 10 minuter vid 95°C, följt av 45 cykler med 95°C i 15 sekunder och 60°C i 60 sekunder. . Kvantifiering baserades på en plasmidstandardkurva. Delta för bakteriekoncentration vid 6 veckor, 3 och 6 månader (skillnaden mellan baslinjemått och vid 6 veckor, 3 och 6 månader) beräknades.

Randomisering, allokeringsdöljande och kalibrering En myntkastningsmetod användes för att dela in patienternas kvadranter i två behandlingsgrupper: (SRP + L-PRF) eller kontroll (enbart SRP).

Innan studien påbörjades gjordes två registreringar av följande parametrar: PPD, GR och CAL hos fem patienter, med ett 24-timmarsintervall mellan första och andra registreringen för att validera intragranskarens noggrannhet. Alla tänder, exklusive tredje molarer, mättes genom periodontal sondering på 6 platser (mesiobuckal, mediobuckal, distobuckal, mesiolingual/palatal, mediolingual/palatal och disstolingual/palatal). Kalibrering accepterades om mätningarna vid baslinjen och efter 24 timmar var inom 1 mm vid 95 %-nivån (korrelationskoefficienter mellan dubbla mätningar; r = 0,95).

Statistisk analys För att detektera en medelskillnad i PPD på 1,2 mm med en standardavvikelse på 1,0 vid en α-nivå på 0,05 och en β-nivå på 0,10 (effekt = 0,9), krävdes en provstorlek på 10 patienter. Trots resultaten men för att förutse potentiella avhopp under studien övervägdes en urvalsstorlek på n = 16 patienter.

Bakterieantal log-transformerades. En linjär blandad modell tillämpades med den variabla patienten, som en slumpmässig faktor och tid och behandling som två korsade fasta faktorer. Rökning och PI ansågs vara kovariabler. Kontraster sattes upp för att beräkna förändringen från baslinjen för de olika tidpunkterna mellan behandlingarna och för varje behandling isär. En korrigering för simultan hypotesprövning enligt Sidak tillämpades. En normal kvantilplot och restprickplot av restvärdena skapades som visar att de antaganden som ligger till grund för den statistiska modellen kunde göras.