L-PRF Plus ikke-kirurgisk paradentosebehandling

Materialer og metoder Undersøgelsesdesign og patientudvælgelse Et randomiseret kontrolleret klinisk forsøg med spaltet mund med 13 patienter (8 mænd og 5 kvinder, gennemsnitsalder 52,3 ± 9,4 år) blev sat op. Patienterne blev informeret om fordele og risici ved undersøgelsen, og hver deltager underskrev informeret samtykke.

Ikke-kirurgisk paradentosebehandling En enkelt parodontist (L.C.) udførte alle parodontale behandlinger. NSPT bestod af to sessioner med skalering og rodplaning (SRP) inden for 48 timer under lokalbedøvelse ved hjælp af ultralyds- og håndinstrumentering. Derudover blev stederne forbundet med PPD ≥ 6 mm i kvadranten tildelt testgruppen skyllet med L-PRF-eksudat og fyldt med langsgående stykker af L-PRF-membran. Patienterne fik instruktioner om blød kost, en omhyggelig og blød mundskylning med klorhexidin 0,12% og ingen tandbørstning i 7 dage for at undgå fjernelse af L-PRF. Efter denne periode blev følgende instruktioner givet: modificeret basbørsteteknik, tandtråd og interdentale børster og klorhexidin 0,12 % mundskyl i yderligere 7 dage. Streng hygiejnekontrol af klinikeren blev også udført i hver aftale.

L-PRF membranpræparation To prøver af venøst ​​blod blev opsamlet i 2 vacutainerrør (rød kop) på 10 ml uden antikoagulant. De blev centrifugeret ved 408 g i 12 minutter under anvendelse af en bordcentrifuge (IntraSpinTM, Intralock®, Florida, USA) ifølge protokollen beskrevet af Temmerman et al.18 L-PRF-koaglerne blev fjernet fra røret, adskilt fra de røde blodlegemer og anbragt i Xpression-boksen (IntraSpinTM, Intralock®, Florida, USA) for forsigtigt at komprimere dem i membraner. Membranerne blev skåret i langsgående stykker for at fylde de periodontale lommer ≥ 6 mm. Ekssudatet, der blev frigivet under kompressionen, kaldet L-PRF-ekssudatet, blev aspireret for at skylle de behandlede lommer. (Figur 1)

Kliniske målinger Alle kliniske målinger blev udført af en enkelt uddannet og kalibreret eksaminator (N.J.), som var maskeret til den tildelte behandling ved hjælp af et grundlæggende undersøgelsesinstrumentsæt og et University of North Carolina nr. 15 farvekodet parodontal sonde. Følgende kliniske parametre blev målt ved baseline og 6 uger, 3 måneder og 6 måneder efter behandling: sonderingslommedybde (PPD), klinisk tilknytningsniveau (CAL), gingival recession (GR), blødning ved sondering (BOP) og O´ Leary plaque index (PI).19 Derudover blev rodfølsomheden (RS) evalueret ved hjælp af en 100 mm visuel analog skala (VAS) (0 indikerer ingen smerte, 50 indikerer gennemsnit og 100 indikerer en uudholdelig smerte) efter 24 timer, 6 uger, 3 måneder og 6 måneder efter behandlingen. Ændringen i PPD, CAL, GR, BOP, PI og RS (forskel mellem baseline-mål og ved 1, 3 og 6 måneder) blev beregnet.

GCF-indsamling GCF-prøver blev indsamlet fra den dybeste lomme fra hver kvadrant før registrering af den kliniske måling (baseline og 6 uger og 3 måneder efter behandling) for at evaluere koncentrationen af ​​Porphyromona gingivalis (P.g), Aggregatibacter actinomycetemcomitans (A.a), Prevotella intermedia (P.i) og Fusobacterium nucleatum (F.n). Prøveområdet blev isoleret med bomuldsruller, og kontaminering med spyt blev undgået ved brug af en passende suge- og luftspray. Derefter blev en endodontisk #35 papir-point indsat, indtil der kunne mærkes en lille modstand, og den blev holdt i 30 sekunder. Papirpunkterne blev straks indsat i et Eppendorf-rør og opbevaret ved -80ºC til fremtidig analyse.

Mikrobiologisk bearbejdning Efter afrimning af prøverne blev 1 ml phosphatpufret saltvand (PBS) tilsat og homogeniseret. Derefter blev 400 μl af hver prøve centrifugeret ved 13200 rpm i 3 minutter. Den opnåede pellet blev dispergeret i 200 μl InstaGene. DNA blev ekstraheret med InstaGene matrix (Bio-Rad Life Science Research, Hercules, CA, USA) i henhold til producentens instruktioner. Fem mikroliter af det oprensede DNA blev brugt til kvantificering af Porphyromonas gingivalis, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Fusobacterium nucleatum og Prevotella intermedia. En kvantitativ polymerasekædereaktion (qPCR) assay blev udført med et CFX96 Real-Time System (Biorad, Hercules, CA, USA) under anvendelse af Taqman 5' nuklease assay PCR-metoden til påvisning og kvantificering af bakterielt DNA. Taqman-reaktionen indeholdt 12,5 μl Mastermix (Eurogentec, Seraing, Belgien), 4,5 μl sterilt destilleret vand, 1 μl af både artsspecifikke primere og probe (tabel 1) og 5 μl template-DNA. Analysebetingelser for alle primer/probe-sæt bestod af en indledende 2 minutter ved 50 °C, efterfulgt af et denatureringstrin i 10 minutter ved 95 °C, efterfulgt af 45 cyklusser af 95 °C i 15 sekunder og 60 °C i 60 sekunder . Kvantificering var baseret på en plasmidstandardkurve. Delta for bakteriel koncentration efter 6 uger, 3 og 6 måneder (forskel mellem baselinemål og ved 6 uger, 3 og 6 måneder) blev beregnet.

Randomisering, tildelingsskjul og kalibrering En møntkastmetode blev brugt til at opdele patienternes kvadranter i to behandlingsgrupper: (SRP + L-PRF) eller kontrol (SRP alene).

Før undersøgelsen påbegyndtes, blev der foretaget to registreringer af følgende parametre: PPD, GR og CAL hos fem patienter med et 24-timers interval mellem første og anden registrering for at validere intra-eksaminatorens nøjagtighed. Alle tænder, undtagen tredje kindtænder, blev målt ved periodontal sondering på 6 steder (mesiobukkal, mediobukkal, distobukkal, mesiolingual/palatal, mediolingual/palatal og disstolingual/palatal). Kalibrering blev accepteret, hvis målingerne ved baseline og efter 24 timer var inden for 1 mm på 95 %-niveauet (korrelationskoefficienter mellem dobbeltmålinger; r = 0,95).

Statistisk analyse For at påvise en gennemsnitlig forskel i PPD på 1,2 mm med en standardafvigelse på 1,0 ved et α-niveau på 0,05 og et β-niveau på 0,10 (power = 0,9), var en prøvestørrelse på 10 patienter påkrævet. På trods af resultaterne, men for at forudse potentielle frafald under undersøgelsen, blev en stikprøvestørrelse på n = 16 patienter overvejet.

Bakterietællinger blev log-transformeret. En lineær blandet model blev anvendt med den variable patient, som en tilfældig faktor og tid og behandling som to krydsede faste faktorer. Rygning og PI blev betragtet som kovariabler. Kontraster blev sat op for at beregne ændringen fra baseline for de forskellige tidspunkter mellem behandlingerne og for hver behandling fra hinanden. En korrektion for simultan hypotesetestning ifølge Sidak blev anvendt. Et normalt kvantilplot og et residualprikplot af restværdierne blev skabt, som viser, at de antagelser, der ligger til grund for den statistiske model, kunne gøres.